蛋白質(zhì)序列測定主要涉及兩個重要步驟:酶解和質(zhì)譜分析。首先,蛋白質(zhì)被特異性的酶(如胰蛋白酶)進行酶解,產(chǎn)生肽段。然后,這些肽段通過質(zhì)譜分析,確定其質(zhì)荷比,這些數(shù)據(jù)可以被用來預測原始蛋白質(zhì)的氨基酸序列。經(jīng)典的質(zhì)譜技術如電噴霧離子源串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-MS/MS)和基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)在蛋白質(zhì)序列測定中有著廣泛的應用。
蛋白質(zhì)序列測定也可以利用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)來進行。在這種方法中,酶解后的肽段首先通過液相色譜進行分離,然后進入質(zhì)譜儀進行定性和定量分析。這種方法不僅可以得到蛋白質(zhì)的氨基酸序列,還可以分析蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,如磷酸化、乙?;取?/p>
常見問題:
Q1:蛋白質(zhì)序列測定為什么要進行酶解步驟?
A:酶解是蛋白質(zhì)序列測定的關鍵步驟,它將復雜的蛋白質(zhì)分解為可由質(zhì)譜儀分析的較小的肽段,使得質(zhì)譜分析可以更準確地預測氨基酸序列。
Q2:在蛋白質(zhì)序列測定中,質(zhì)譜分析可以提供哪些信息?
A:質(zhì)譜分析可以提供肽段的質(zhì)荷比(m/z)信息,這些信息可以用來預測原始蛋白質(zhì)的氨基酸序列。如果采用串聯(lián)質(zhì)譜,還可以得到肽段的內(nèi)部氨基酸序列信息。此外,質(zhì)譜分析還可以檢測蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,如磷酸化、乙?;取?/p>
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對蛋白質(zhì)序列進行分析,提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務,包括對蛋白質(zhì)的氨基酸組成分析,N端測序,C端測序和全序列分析,以及基于埃德曼降解的蛋白質(zhì)N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質(zhì),提供基于從頭測序法的蛋白質(zhì)從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優(yōu)勢:
1.采用目前世界上先進的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,提供定量蛋白質(zhì)組學、靶向蛋白質(zhì)組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質(zhì)組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質(zhì)組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優(yōu)勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;
2.體內(nèi)體外多種蛋白質(zhì)標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質(zhì)譜分析靈敏度高,實驗結(jié)果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.專業(yè)生物信息學分析,分析更系統(tǒng)準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內(nèi)部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質(zhì)量譜,最后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。
※服務優(yōu)勢:
1.技術先進,填補技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題??稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數(shù)量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右,而流式質(zhì)譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現(xiàn)了數(shù)量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結(jié)合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外,質(zhì)譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從最小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從蛋白質(zhì)、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構分析,到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務,幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。
百泰派克生物科技(BTP)采用優(yōu)化的CRISPR/Cas9系統(tǒng)為您提供高通量基因敲除服務,包括病毒包裝、質(zhì)粒制備、Cas9濃度測試等,為您解決選擇哪個細胞進行敲除、可不可以敲除、如何敲除以及敲除效率如何等關鍵問題??蛇M行單/多基因敲除、移碼突變和大序列敲除。我們的人全基因組基因敲除陣列Array文庫覆蓋了完整的人類全基因組,全基因組陣列敲除庫已在人原代細胞全部完成高內(nèi)涵篩選的驗證,超過80%以上的靶點達到70%以上的敲除效率。
※服務優(yōu)勢:
1.樣本適用性強
適用于人、小鼠的細胞系,原代細胞,免疫細胞及iPS細胞等。
2.基因必要性及表達量分析
在進行基因敲除實驗前,我們會基于生物信息學和蛋白質(zhì)組學數(shù)據(jù)對不同細胞中基因必要性及表達量進行分析,確保實驗的可行性,降低實驗風險。
3.gRNA無需從頭設計和驗證
我們完成了人類全基因組gRNA的全部驗證,與藥物相關的靶點也完成了PCR測序驗證,無需針對客戶的靶點設計預實驗進行gRNA驗證,大大縮短了項目周期。
4.高通量高效率
我們采用優(yōu)化的CRISPR/Cas9系統(tǒng)進行高通量基因敲除,多個sgRNA/靶基因設計保證高敲除效率,超過80%靶點敲除效率在70%以上,短期內(nèi)(10天內(nèi))即可提供高敲除效率的KO pool,滿足絕大多數(shù)的應用場景。
5.敲除效率雙驗證
基因敲除后,我們采用WB實驗中抗體KO驗證的首選方法——Sanger測序和深度蛋白質(zhì)組學技術對敲除效率進行雙驗證,數(shù)據(jù)真實性的雙重保障。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等專業(yè)服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證,建立了完備的質(zhì)量體系,數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。
1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,專業(yè)提供以質(zhì)譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務;
3.業(yè)務范圍覆蓋蛋白質(zhì)組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等;
4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業(yè),10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!
蛋白質(zhì)序列測定的原理和方法由北京百泰派克生物科技有限公司為您提供,如您想了解更多關于蛋白質(zhì)序列測定的原理和方法 報價、型號、參數(shù)等信息,歡迎來電或留言咨詢。
注:該產(chǎn)品未在中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理部門申請醫(yī)療器械注冊和備案,不可用于臨床診斷或治療等相關用途。