本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了媒介染料染色色光和強度的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于媒介染料染色色光和強度的測定。
R&D Systems如今提供了多色的流式分析試劑盒,其中最多包含與四種不同的熒光染料結(jié)合的抗體:藻紅蛋白(PE)、別藻藍(lán)蛋白(APC)、多甲藻素葉綠素蛋白復(fù)合物(PerCP)和羥基熒光素(CFS)??贵w特異熒光染料的應(yīng)用實現(xiàn)了最多四種不同靶分子的同時評估。洗滌后的細(xì)胞經(jīng)過熒光染色,其染色強度與靶分子的表達(dá)成正比。所有的多色流式分析試劑盒都包含每種抗體的同型對照,提供特異的實驗對比。 ...
但陰性細(xì)胞群的熒光信號受到信號強度、自發(fā)熒光、非特異性染色、儀器的電子噪聲等多個因素相關(guān)。?? ? ? ?熒光染料染色指數(shù)是陽性細(xì)胞群的平均熒光強度與陰性細(xì)胞群的平均熒光強度之差與陰性細(xì)胞群熒光強度標(biāo)準(zhǔn)差之間比值的一半。熒光染料染色系數(shù)只和抗體克隆與質(zhì)量、熒光團純度與質(zhì)量、熒光修飾比、激光線及其功率、長通和帶通濾光片、目的細(xì)胞等因素相關(guān)。?? ? ? ?...
除了要保證激發(fā)片和發(fā)射片的交點具有一定的OD值,激發(fā)片具體位置的選擇還要綜合考慮所用光源的譜線位置以及染料的最大吸收位置,因為很多光源的輸出為分立不連續(xù)的譜線(例如汞燈及金屬氯化物燈)。另外,通過OD值譜圖可以發(fā)現(xiàn),二向色鏡的OD值要遠(yuǎn)小于激發(fā)片和發(fā)射片,表明其阻擋能力很弱。所以二向色鏡在使用時只能用于分光和改變光的傳播方向,而不能用于完全阻擋光源的雜散光。...
測量群體中單個細(xì)胞經(jīng)適當(dāng)染色后其成分所發(fā)出的散射光和熒光,經(jīng)染色的細(xì)胞在懸液中以單行流過高強度光源的焦點,當(dāng)每個細(xì)胞經(jīng)過焦點時,發(fā)出一束散射光/或熒光,經(jīng)過過濾及光鏡系統(tǒng)收集到達(dá)一個光電檢測器,光檢測器把散射光定量轉(zhuǎn)化成電信號,經(jīng)數(shù)字轉(zhuǎn)換器進行數(shù)字化后而成整數(shù),以調(diào)出顯示和進行分析。一、樣品的制備細(xì)胞必須做成單個細(xì)胞懸浮狀態(tài),細(xì)胞濃度要保證在1~2×106/ml。...
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