T/YNRZ 011-2024
咖啡生豆氨基酸總量測(cè)定 分光光度法

The Determination of Total Amino Acids in Coffee beans With Spectrophotometry

標(biāo)準(zhǔn)號(hào)

T/YNRZ 011-2024

發(fā)布

2024年

發(fā)布單位

中國(guó)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

當(dāng)前最新

T/YNRZ 011-2024

 

 

適用范圍

1　術(shù)語和定義 下列術(shù)語和定義適用于本文件。 1.1  咖啡生豆  咖啡生豆即未烘焙過的咖啡豆，按GB/T 18007 的5.6規(guī)定執(zhí)行 1.2  茚三酮比色法 按GB 5009.124規(guī)定執(zhí)行 2　原理 氨基酸在pH8.0的條件下與茚三酮反應(yīng)，形成紫色絡(luò)合物，用分光光度法在570 nm的波長(zhǎng)下測(cè)定其含量。 3　儀器和器皿 3.1  分析天平：感量0.0001 g。 3.2  可見光分光光度儀。 3.3  安瓿瓶。 3.4  陶瓷蒸發(fā)皿。 3.5  比色管：磨口，50 mL。 3.6  比色杯：1 cm。 3.7  容量瓶：25 mL、50 mL、100 mL、1000 mL。 3.8  酒精噴燈。 3.9  研磨機(jī)或組織粉碎機(jī)。 4　試劑和溶液 除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純（AR），水為蒸餾水。 4.1  試劑 4.1.1  亮氨酸：純度≥98%。 4.1.2  濃鹽酸（HCl）：質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥36%。 4.1.3  磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O）。 4.1.4  磷酸二氫鉀（KH2PO4）。 4.1.5  茚三酮：純度≥95%。 4.1.6  氯化亞錫（SnCl2?2H2O）。 4.2  溶液配制 4.2.1  6 mol/L鹽酸溶液：取500 mL濃鹽酸（6.1.2）加水稀釋至1000 mL，混勻。 4.2.2  pH8.0磷酸鹽緩沖液配制 4.2.2.1  1/15 mol/L磷酸氫二鈉：稱取11.9 g十二水磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O），加水溶解后定容至1000 mL。 4.2.2.2  1/15 mol/L磷酸二氫鉀：稱取經(jīng)110 ℃烘干2小時(shí)的磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.908 g，加水溶解后定容至100 mL，搖勻備用。 4.2.2.3  取1/15 mol/L磷酸氫二鈉溶液（6.2.2.1）950 mL和1/15 mol/L磷酸二氫鉀溶液（6.2.2.2）50 mL，混勻，該混合溶液pH為8.0。 4.2.3  2%茚三酮溶液配制  稱取茚三酮（純度≥95%）2 g，加50 mL水和80 mg氯化亞錫（SnCl2?2H2O）攪拌均勻。分次加少量水溶解，放在暗處，靜置一晝夜，過濾后加水定容至100 mL容量瓶中，搖勻備用。 4.2.4  標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 4.2.4.1 亮氨酸10 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精確稱量亮氨酸（純度≥98%）0.25 g，用蒸餾水溶解后，定量轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶中，加水至標(biāo)線，搖勻，此時(shí)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 mL含有10 mg的亮氨酸。 4.2.4.2 亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：精確移取0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL、3.00 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（6.2.4.1），分別加水定容至50 mL容量瓶中，搖勻。該系列標(biāo)準(zhǔn)工作液1 mL分別含有0.10 mg、0.20 mg、0.30 mg、0.40 mg、0.50 mg、0.60 mg亮氨酸。 5　分析步驟 5.1  樣品制備 取樣按照NY/T1518的規(guī)定執(zhí)行，樣品制備按照GB5009.124-2016中5.1的規(guī)定。 5.2  樣品試液制備 稱取試樣100 mg～200 mg（0.1 mg），于10 mL安瓿瓶中，準(zhǔn)確加入10 mL 6 mol/L鹽酸溶液，用酒精噴燈封口，封口后的安瓿瓶放入110℃±1恒溫箱內(nèi)水解24 h后，取出冷卻至室溫。打開安瓿瓶將水解液全部轉(zhuǎn)移至陶瓷蒸發(fā)皿中，70℃水浴蒸干，加水溶解后過濾至容量瓶中用水定容至100 mL，制成待測(cè)液，備用。 5.3  測(cè)定 準(zhǔn)確吸取待測(cè)液（7.2）1 mL，注入50 mL比色管中，加0.5 mL pH8.0磷酸緩沖液（6.2.2）和0.5 mL 2%茚三酮溶液（6.2.3），混合均勻，在沸水浴中加熱15 min，立即冷卻后加水定容至50 mL。放置10 min后，1 cm比色杯，在570 nm處，以試劑空白溶液作參比，測(cè)定吸光度(A)。 5.4  亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 分別準(zhǔn)確吸取1 mL亮氨酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作液（6.2.4.2）于一組50 mL比色管中，按7.3的操作測(cè)定吸光度(A)。將測(cè)得的吸光度作為y坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的亮氨酸含量作為x坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 5.5  空白試驗(yàn) 除不加試樣外，均按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。 6　結(jié)果計(jì)算 6.1  計(jì)算方法 咖啡生豆中氨基酸總量以干基質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示，按式（1）計(jì)算： 式中： C —根據(jù)7.4測(cè)定的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的亮氨酸的毫克數(shù)，單位為毫克（mg）； V1 —試液總量，單位為毫升（mL）； V2 —測(cè)試用試液量，單位為毫升(mL)； m —試樣重量，單位為克（g）； ω —試樣干物質(zhì)含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）（%）。 取兩次測(cè)定的算數(shù)平均值作為結(jié)果，保留小數(shù)點(diǎn)后2位。 6.2  重復(fù)性 在重復(fù)條件下同一樣品獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的5%。 7　檢測(cè)報(bào)告 檢測(cè)報(bào)告應(yīng)包括下列內(nèi)容： ——使用的方法； ——測(cè)定的結(jié)果（取小數(shù)點(diǎn)后兩位）； ——試樣的規(guī)格、名稱、產(chǎn)地、品種； 試驗(yàn)日期、操作人員。

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