PCR芯片服務(wù)
PCR芯片是經(jīng)過對(duì)Q-PCR體系優(yōu)化而開發(fā)的PCR檢測(cè)體系??朔薗-PCR檢測(cè)基因表達(dá)數(shù)量少等不足之處,其同時(shí)可對(duì)多種基因進(jìn)行研究,且可在更短的時(shí)間內(nèi)得到更豐富的信息。PCR芯片實(shí)驗(yàn)僅需2小時(shí)。PCR芯片可廣泛用于生命科學(xué)、生物技術(shù)、疾病檢測(cè)、臨床醫(yī)學(xué)和環(huán)境檢測(cè)等領(lǐng)域,是近年生命科學(xué)領(lǐng)域常用的研究手段之一。
PCR芯片實(shí)驗(yàn)過程:
1. 將RNA樣品反轉(zhuǎn)錄為cDNA第一鏈,作為PCR模板。
2. 將模板加入到反應(yīng)體系(RT2Real-TimeTMSYBRGreenPCRMasterMix)中。
3. 在已經(jīng)固定好基因特異性引物的96孔板各孔中,加入等量的PCR反應(yīng)體系,進(jìn)行PCR反應(yīng)。
4. 采用儀器配套的軟件計(jì)算PCR芯片中的每個(gè)基因的循環(huán)閾值(Ct)。
5. 最后,采用△△Ct方法比較對(duì)應(yīng)的兩個(gè)樣本中同一基因的表達(dá)量變化。通過分析看家基因Ct值的一致性,可確定合適的標(biāo)準(zhǔn)化方法。芯片所設(shè)置的對(duì)照,可以檢測(cè)PCR體系中是否存在DNA污染,或者是否有影響反轉(zhuǎn)錄或PCR實(shí)驗(yàn)步驟的因素存在。
該技術(shù)存在一定技術(shù)難度,主要難點(diǎn)在與相同的PCR反應(yīng)條件下保證不同的基因有相近的擴(kuò)增效率,并且獲得與單個(gè)基因?qū)崟r(shí)定量PCR反應(yīng)相當(dāng)?shù)撵`敏度,特異性和可重復(fù)性。因此需進(jìn)行PCR引物和反應(yīng)條件的優(yōu)化。
與普通PCR相比,PCR芯片具有整體性,操作簡(jiǎn)便,效率高,反應(yīng)體系小,便于集成化,結(jié)果可靠等優(yōu)勢(shì)。
服務(wù)流程:
1. 提取樣本RNA
2. RNA質(zhì)量檢測(cè)
3. cDNA模板制備
4. 數(shù)據(jù)處理
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注:該產(chǎn)品未在中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理部門申請(qǐng)醫(yī)療器械注冊(cè)和備案,不可用于臨床診斷或治療等相關(guān)用途