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液相色譜的清洗方案

基泰生物
2021.11.18

液相色譜的清洗方案

液相色譜儀器使用中一定要做好及時的清洗避免堵塞。

我們將結(jié)合WATERS UPLC的清洗方案來看看如何做好清洗。

當(dāng)出現(xiàn)以下幾種情況的時候應(yīng)當(dāng)對儀器進行清洗：

紫外檢測系統(tǒng)的噪音增大和/或基線漂移。

質(zhì)譜檢測系統(tǒng)的靈敏度下降和/或信噪比變差。

在通過ACQUITY UPLC控制臺進行檢測器燈的能量診斷時，觀察到能量偏低（請參考ACQUITYUPLC控制臺在線幫助）。

在檢測復(fù)雜生物基質(zhì)時，觀察到峰變形和/或進樣次數(shù)偏多。

有必要將本系統(tǒng)的流路系統(tǒng)恢復(fù)至幾乎全新的潔凈水平。

本系統(tǒng)的清洗方法程序如下：

1. 拆除所有的溶劑過濾頭。

2. 將色譜柱從系統(tǒng)分開，并在色譜柱的入口管路和出口管處路連接一個UPLC專用的兩通（P/N700002636）或限流器（P/N205000547）。

3. 將A1 、A2、B1、B2流動相、柱塞桿密封墊沖洗、進樣針弱洗和進樣針強洗管路放入一個裝有100%異丙醇的潔凈瓶中。

說明：如果當(dāng)前您的UPLC系統(tǒng)里的流動相或溶劑與異丙醇不相容，則先用合適的中間溶液沖洗，以確保相容。

4. 沖洗溶劑管路A1、A2、B1、B2各5min。

5. 沖洗柱塞桿密封墊。

6. 對強洗、弱洗和樣品注射器進行5次沖洗。

7. 用50%A1和50%B1,以0.2mL/min的流速清洗系統(tǒng)5.0min。

8. 用50%A2和50%B2重復(fù)進行步驟7.

9. 將清洗溶劑放入樣品瓶中，進行15次滿定量環(huán)進樣（進樣方法請選擇5Xoverfill）,運行時間=0.2min/流速=0.2mL/min。

10. 用100%甲醇重復(fù)進行3-9步，但第7-9步的流速改為1.0mL/min。

11. 用MilliQ水（或等價物）重復(fù)進行第3-9步，但第7-9步的流速改為1.0mL/min。

注意：如果連接有質(zhì)譜檢測器，則在進行第12步之前，將其從管道上移除。將洗液流向從兩通或限流器出口轉(zhuǎn)向廢液排放口。適當(dāng)時，你可將TUV或PDA留在管路上。然而，你可能需要更換成內(nèi)徑較大的廢液管路以取代原來的限流器，以將壓力保持在1000Psi以下，避免反壓過高而損壞檢測池。

12. 用30%硫酸水溶液重復(fù)進行第3-9步，但第7-9步的流速改為1.0mL/min。

注意：為避免損壞，請不要將密封墊沖洗管路置于本溶液中，請按照第14步，將該管路置于MilliQ水（或等價物）中。

13. 用MilliQ水（或等價物）重復(fù)進行第3-9步，但第7-9步的流速改為1.0mL/min。在繼續(xù)進行下一步前，應(yīng)持續(xù)沖洗，直至酸堿度呈中性（PH=7）。

14. 如有必要，重新連接質(zhì)譜檢測器。

15. 用100%甲醇重復(fù)進行第3-9步，但7-9步的流速改為1.0mL/min。

若想儀器用的好，維護保養(yǎng)很重要。儀器使用過程中，千萬不要忽略或者省去一些看似不重要的步驟，例如流動相過濾、水相的更換、進樣之前樣品過濾膜等，等儀器出現(xiàn)故障之后，維修的成本和浪費的時間遠大于平時的維護保養(yǎng)。

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