葉綠素的提取和分離方法
提取
葉綠素提取的準(zhǔn)備工作是在一個(gè)半暗的房間里，室溫保持在25℃。提取步驟如下：
(1) 取1000克新鮮的綠葉，在韋氏攪切器中粉碎。
(2) 將粉碎的1000克綠葉放進(jìn)加有少量的碳酸鈣的丙酮中（溫度20℃）進(jìn)行萃取，直到過(guò)濾、清洗后的葉子碎片為無(wú)色。
(3) 將過(guò)濾后的丙酮提取液放到盛有1升石油醚和100mL丙酮的漏斗中，然后輕輕地旋轉(zhuǎn)，同時(shí)加放蒸餾水直到分層為止。水層的大部分丙酮和水溶雜質(zhì)被丟棄，只剩石油醚溶液。
(4) 將石油醚溶液用蒸餾水再次凈化后，用含有石油醚和0.01克草酸的200mL 80%的甲醇溶液清洗5次以上，最后得到黃綠色懸浮液。
(5)用無(wú)水硫酸鈉對(duì)懸浮液進(jìn)行干燥，并將其滲入到3cm厚的蔗糖粉末制成柱中，然后用石油醚清洗沉淀的色素去掉類胡蘿卜素，使之只含有天然的葉綠素。
(6) 含有天然葉綠素的蔗糖柱分兩層，綠層有4-10mm的葉綠素b層，另一藍(lán)層為2-6mm的葉綠素a層。
(7) 將位于藍(lán)層正中的部分（約占藍(lán)層的一半）放入醚中，對(duì)此懸浮液進(jìn)行過(guò)濾、洗提，用蒸餾水清洗，用硫酸鈉干燥，再用器皿進(jìn)行過(guò)濾后，得到葉綠素a。
(8) 將(6)中的綠層中間部分移出，迅速放入醚中過(guò)濾、洗提，制成葉綠素b醚溶液。
分離
色譜法是一種很好的分離純化、鑒定有機(jī)化合物的重要方法，尤其是在微量分析中應(yīng)用的更是廣泛。果蔬中色素主要包括脂溶性的胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素和水溶性的花青素。在提取實(shí)驗(yàn)時(shí)，我們可以利用相似相溶的原理把水溶性的花青素濾掉，繼而可以利用薄層色譜、柱色譜、高效液相色譜對(duì)胡蘿卜素、葉黃素和葉綠素進(jìn)行分離，由于這三種色素的極性依次減弱，可以適當(dāng)?shù)剡x擇單一的有機(jī)溶劑或者不同配比的混合溶劑作為展開劑和洗脫劑，確定最佳的優(yōu)化分離條件。
