SYBR Green染料法介紹
TaqMan探針法因其良好的特異性以及可多重檢測而受到實驗人員的青睞，其實除了探針法外，還有很多好的實驗方法也被實驗人員廣泛認可，這次就介紹一下另一個應(yīng)用廣泛的方法：SYBR Green染料法，它又是因為哪些優(yōu)點獲得實驗人員的青睞呢？
染料法原理
染料法一般使用的是SYBR Green I染料，這是一種可以與雙鏈DNA小溝結(jié)合的熒光染料，其不會與單鏈DNA結(jié)合，且在游離狀態(tài)下幾乎無熒光，只有與雙鏈DNA結(jié)合才會發(fā)出熒光，因此將PCR擴增產(chǎn)生的雙鏈DNA數(shù)量與熒光強度直接關(guān)聯(lián)，產(chǎn)生實時監(jiān)測的效果。
SYBR Green染料法優(yōu)點
? ?通用性好，適合進行大多數(shù)類型的定量反應(yīng)，可以進行熔解曲線的分析。
? ?無需設(shè)計探針，引物設(shè)計相對簡單，不用考慮基團選擇，易于上手；成本低，無需合成探針。
? ?無需PCR后處理，減少分析工作量并節(jié)省材料成本。
SYBR Green染料法缺點
SYBR Green染料法也有其缺點，SYBR Green染料法一個反應(yīng)只能檢測一個基因，無法進行二重甚至多重的實驗。同樣的相對于TaqMan探針法其特異性較差，當引物存在二聚體或者非特異性擴增時，染料同樣可以結(jié)合并發(fā)出熒光，影響定量結(jié)果。因此對于SYBR Green染料法而言，設(shè)計一套好用的引物是重中之重。
深藍云生物為您提供Gene-π網(wǎng)站在線設(shè)計引物，可為您快速設(shè)計引物并進行評估，復制鏈接可進行查詢：https://www.gene-pi.com/item/primers-and-probes-2/
?
設(shè)計好引物后，我們該怎么進行實驗呢？
1.實驗條件的優(yōu)化
我們需要對設(shè)計的引物擴增效果進行分析，使用陽性模板進行擴增，確定擴增產(chǎn)物為單一條帶，且大小符合設(shè)計預期，如有條件可以對擴增產(chǎn)物進行測序，保證準確性。當引物無問題后，進行反應(yīng)條件的探索，對退火溫度進行溫度梯度檢測，找到合適的退火溫度，即PCR擴增效果最好，陰性模板無擴增，條帶單一，熔解曲線單峰等。
2.預實驗
設(shè)計好引物并探索好實驗條件后，對樣本進行一次預實驗，預實驗將樣本進行梯度稀釋用以制作標準曲線，分析內(nèi)參基因以及目的基因的擴增效率是否接近且在100%左右，其次可確認高濃度模板中是否有抑制劑干擾，從而確定實驗時合適的模板濃度（樣本是否需要稀釋或濃縮）。
3.正式實驗
當我們完成了實驗條件和預實驗后就可以進行正式實驗了，每個樣品都需要3個或以上的重復，保證結(jié)果的準確性。
?
Azure Cielo?實時熒光定量PCR
來自美國Azure Biosystems公司的Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統(tǒng)，為您提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道兩種機型，可根據(jù)實驗需求靈活配置。
除此之外，Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統(tǒng)融合了高品質(zhì)Peltier溫度模塊和基于光纖傳輸?shù)墓鈱W檢測系統(tǒng)，可為您的科學研究就提供高精準、高靈敏可靠結(jié)果。
?
?
? ? 數(shù)據(jù)可靠性
連續(xù)1000次實驗后，結(jié)果高度一致，溫控精準，性能穩(wěn)定可靠。
? ?應(yīng)用靈活性
提供多種qPCR應(yīng)用分析，定制化報告。
? ? 流程智能化
中英文用戶界面，觸控操作，可多機聯(lián)用。
? ? 交互靈活性
主機可獨立運行qPCR程序，電腦、Wi-Fi、網(wǎng)絡(luò)交互。
