2020版《中國(guó)藥典》三部--人用重組單克隆抗體制品總論
1 概述
人用重組單克隆抗體制品，系指采用各種單克隆抗體篩選技術(shù)、重組DNA技術(shù)及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)制備的單克隆抗體治療藥物，包括完整免疫球蛋白、具有特異性靶點(diǎn)的免疫球蛋白片段、基于抗體結(jié)構(gòu)的融合蛋白、抗體偶聯(lián)藥物等。其作用機(jī)制是通過與相應(yīng)抗原的特異性結(jié)合，從而直接發(fā)揮中和或阻斷作用，或者間接通過Fc效應(yīng)子發(fā)揮包括抗體依賴和補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒作用等生物學(xué)功能。
本總論是對(duì)人用重組單克隆抗體制品生產(chǎn)和質(zhì)量控制的通用性技術(shù)要求，由于此類制品種類較多，本總論內(nèi)容重點(diǎn)闡述以哺乳動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)制備的IgG型單克隆抗體制品，但其生產(chǎn)和質(zhì)量控制的基本原則及分析方法，同樣適用于其他各類重組單克隆抗體類生物治療藥物及其體內(nèi)診斷藥品。具體品種還應(yīng)同時(shí)符合“人用重組DNA蛋白制品總論”與抗體制品相應(yīng)各論的要求。
2 制造
2.1 基本要求
人用重組單克隆抗體制品具有復(fù)雜的質(zhì)量屬性，應(yīng)在充分了解制品質(zhì)量屬性的基礎(chǔ)上確定制品關(guān)鍵質(zhì)量屬性，以“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”“風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估”的原則和理念，制定相應(yīng)的質(zhì)量控制策略，并通過建立有效的“質(zhì)量管理體系”，保證制品質(zhì)量可控。人用重組單克隆抗體制品的制造主要包括基因克隆、表達(dá)載體的制備、工程細(xì)胞的篩選及細(xì)胞庫(kù)的建立、發(fā)酵或細(xì)胞培養(yǎng)及收獲、目的蛋白的提取、純化和制劑等過程。
生產(chǎn)過程中使用的原材料和輔料應(yīng)符合相關(guān)要求。細(xì)胞株的來(lái)源、管理及檢定應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理及質(zhì)量控制”和“生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制”的相關(guān)要求。生產(chǎn)質(zhì)量管理應(yīng)符合中國(guó)現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。
2.1.1 工藝驗(yàn)證
應(yīng)采用經(jīng)驗(yàn)證的生產(chǎn)工藝進(jìn)行生產(chǎn)，并依據(jù)制品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，確定關(guān)鍵工藝參數(shù)及其范圍，以確保工藝過程的重現(xiàn)性以及制品質(zhì)量的批間一致性。
生產(chǎn)工藝驗(yàn)證應(yīng)至少包括生產(chǎn)工藝的一致性，感染性因子滅活或去除，非內(nèi)毒素?zé)嵩?、制品相關(guān)雜質(zhì)和工藝相關(guān)雜質(zhì)的去除，純化用材料（如色譜柱填料）的重復(fù)使用性的可接受限度，制品質(zhì)量屬性批間一致性，抗體偶聯(lián)藥物的偶聯(lián)方法或基于品種質(zhì)量屬性的其他抗體修飾方法，以及對(duì)生產(chǎn)中所需一次性材料的監(jiān)控等。
2.1.2 特性分析
應(yīng)采用現(xiàn)有先進(jìn)的分析手段，從物理化學(xué)、免疫學(xué)、生物學(xué)等角度對(duì)制品進(jìn)行全面的分析，并提供盡可能詳盡的信息，以反映目標(biāo)產(chǎn)品內(nèi)在的天然質(zhì)量屬性。抗體特性分析至少包括結(jié)構(gòu)完整性、亞類、氨基酸序列、二級(jí)結(jié)構(gòu)、糖基化修飾、二硫鍵、特異性、親和力、特異的生物學(xué)活性和異質(zhì)性，以及是否與人體組織有交叉反應(yīng)等。對(duì)于通過片段化或偶聯(lián)修飾的制品，要確定使用的工藝對(duì)抗體質(zhì)量屬性的影響，并建立特異的分析方法。此外，還需采用合適的方法評(píng)價(jià)制品在有效期內(nèi)的穩(wěn)定性。
生產(chǎn)工藝驗(yàn)證、關(guān)鍵質(zhì)量屬性的確認(rèn)以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立均有賴于對(duì)制品特性分析數(shù)據(jù)的不斷積累。特性分析一般在研發(fā)階段即應(yīng)進(jìn)行，并通過生產(chǎn)工藝的優(yōu)化，以及具有代表性的足夠批次制品的周期性監(jiān)測(cè)加以完善。
2.1.3 生物學(xué)活性測(cè)定
依據(jù)單克隆抗體預(yù)期的、潛在的作用機(jī)制或工作模式（可能不限于一種），建立相應(yīng)生物學(xué)分析方法。
2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
選擇已證明足夠穩(wěn)定且適合臨床試驗(yàn)的一個(gè)（多個(gè)）批次，或用一個(gè)代表批次作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用于鑒別、理化和生物學(xué)活性等各種分析，并應(yīng)按特性分析要求進(jìn)行全面分析鑒定。
2.1.5 中間產(chǎn)物
生產(chǎn)工藝的設(shè)定應(yīng)優(yōu)先采用連續(xù)不間斷的生產(chǎn)方式，如需貯存中間產(chǎn)物，應(yīng)對(duì)中間產(chǎn)物的貯存條件進(jìn)行驗(yàn)證，證明該貯存條件不影響后續(xù)工藝用物料的質(zhì)量指標(biāo)和制品在有效期內(nèi)的穩(wěn)定性。
2.1.6 批次的確定
制品批次的確定應(yīng)符合“生物制品分包裝及貯運(yùn)管理”，制品的批次應(yīng)貫穿整個(gè)工藝過程并易于追溯，以保證每批制品的加工處理過程是一致的。
2.1.7 工藝變更
生產(chǎn)工藝變更應(yīng)符合國(guó)家藥品注冊(cè)管理的相關(guān)要求。應(yīng)對(duì)變更前后的制品進(jìn)行比較和評(píng)估，以證明變更前后制品的特性高度相似，并確保任何質(zhì)量屬性方面的改變對(duì)制品安全性和有效性無(wú)負(fù)面影響。
2.2 工程細(xì)胞的控制
應(yīng)分別建立主細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)的兩級(jí)管理細(xì)胞庫(kù)。一般情況下主細(xì)胞庫(kù)來(lái)自于細(xì)胞種子，工作細(xì)胞庫(kù)來(lái)自主細(xì)胞庫(kù)。主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)均應(yīng)有詳細(xì)的制備過程、檢定情況及管理規(guī)定，并應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制”和“人用重組DNA蛋白制品總論”的相關(guān)要求。
2.3 細(xì)胞培養(yǎng)和收獲
細(xì)胞培養(yǎng)和收獲可采用限定細(xì)胞傳代至與其穩(wěn)定性相符的最高代次后，單次收獲產(chǎn)物的方式；也可采用限定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間連續(xù)傳代培養(yǎng)并多次收獲的方式。在整個(gè)培養(yǎng)過程中，兩種方式均需監(jiān)測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，并根據(jù)生產(chǎn)系統(tǒng)的特點(diǎn)確定監(jiān)測(cè)頻率及檢測(cè)指標(biāo)。應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)過程中培養(yǎng)、增殖和表達(dá)量一致性的研究資料，確定終止培養(yǎng)、廢棄培養(yǎng)物以及摒棄收獲物的技術(shù)參數(shù)。
每次收獲后均應(yīng)檢測(cè)抗體含量、細(xì)菌內(nèi)毒素及支原體。應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)過程及所用材料的特點(diǎn)，在合適的階段進(jìn)行常規(guī)或特定的外源病毒污染檢查。除另有規(guī)定外，應(yīng)對(duì)限定細(xì)胞傳代次數(shù)的生產(chǎn)方式，采用適當(dāng)?shù)捏w外方法至少對(duì)3次收獲物進(jìn)行外源病毒檢測(cè)。
應(yīng)明確進(jìn)入下一步工藝的收獲液接收標(biāo)準(zhǔn)，并與監(jiān)測(cè)步驟關(guān)聯(lián)。如檢測(cè)到任何外源病毒，應(yīng)停止收獲并廢棄同一細(xì)胞培養(yǎng)的前期收獲液，追溯并確定污染的來(lái)源。
2.4 純化
可將多次收獲的產(chǎn)物合并后進(jìn)行純化。純化工藝應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證，以證明能夠有效去除和（或）滅活可能存在的感染性因子，并能將制品相關(guān)雜質(zhì)與工藝相關(guān)雜質(zhì)去除或降低至可接受的水平。如驗(yàn)證結(jié)果證明工藝相關(guān)雜質(zhì)已得到有效地控制或去除，并達(dá)到可接受的水平，相關(guān)殘留物的檢定項(xiàng)目可不列入成品的常規(guī)放行檢定中。應(yīng)對(duì)工藝過程中微生物污染進(jìn)行監(jiān)控（如微生物限度、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查等）。
2.5 原液
純化的單克隆抗體經(jīng)除菌過濾分裝于中間貯存容器中，即成為原液。如需加入穩(wěn)定劑或賦形劑，應(yīng)不影響質(zhì)量檢定，否則應(yīng)在添加輔料前取樣進(jìn)行原液檢定。原液的檢測(cè)項(xiàng)目取決于工藝的驗(yàn)證、一致性的確認(rèn)和預(yù)期產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)與工藝相關(guān)雜質(zhì)的水平。應(yīng)采用適當(dāng)方法對(duì)原液質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，必要時(shí)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行比較。原液的貯存應(yīng)考慮原液與容器的相容性、原液的穩(wěn)定性及保存時(shí)間，應(yīng)通過驗(yàn)證確定貯存條件和有效期。
2.6 半成品
可由一批或多批原液合并生產(chǎn)半成品。擬混合的每批原液應(yīng)在有效期內(nèi)且應(yīng)符合擬制備制劑的有效期要求，每批原液應(yīng)按規(guī)定的工藝生產(chǎn)、單獨(dú)檢驗(yàn)，并符合相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；不得將不合格批次與其他合格批次原液進(jìn)行混合制備半成品；混合的各批原液應(yīng)可有效追溯；應(yīng)對(duì)混合工藝進(jìn)行驗(yàn)證。
除另有規(guī)定外，制備成品前，如需對(duì)原液進(jìn)行稀釋或加入其他輔料制成半成品，應(yīng)確定半成品的質(zhì)量控制要求，包括檢定項(xiàng)目和可接受的標(biāo)準(zhǔn)。
2.7 成品
原液或半成品經(jīng)除菌過濾后分裝于無(wú)菌終容器中并經(jīng)包裝后即為成品。將分裝后的無(wú)菌容器密封，以防污染，如需冷凍干燥，先進(jìn)行冷凍干燥再密封。
3 制品檢定
應(yīng)根據(jù)制品關(guān)鍵質(zhì)量屬性、對(duì)制品和工藝?yán)斫庹J(rèn)識(shí)的積累和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的原則，制定相應(yīng)質(zhì)量控制策略。制品檢定采用的檢測(cè)方法應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證并符合要求。納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢定項(xiàng)目、可接受標(biāo)準(zhǔn)限度，應(yīng)結(jié)合來(lái)自于臨床前和（或）臨床研究時(shí)多批樣品的數(shù)據(jù)、用于證明生產(chǎn)一致性批次的數(shù)據(jù)、穩(wěn)定性等研究數(shù)據(jù)來(lái)綜合確定。應(yīng)根據(jù)重組單克隆抗體制品內(nèi)在固有質(zhì)量屬性的差異與不同，確定制品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA），選擇相應(yīng)適宜的分析方法開展質(zhì)量檢定。
3.1 鑒別與一致性分析
3.1.1 鑒別
采用高度特異的、基于分子結(jié)構(gòu)和（或）其他專屬性的分析方法，對(duì)供試品進(jìn)行鑒別。根據(jù)制品特性，可選擇適宜的方法，如毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）、毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦電泳（cIEF）、離子交換高效液相色譜（IEX-HPLC）、肽圖、生物和（或）免疫學(xué)等方法中的一種或一種以上，對(duì)供試品進(jìn)行鑒別，測(cè)定結(jié)果應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。必要時(shí)應(yīng)將供試品與參比品比較。
3.1.2 糖基化修飾分析
關(guān)鍵質(zhì)量屬性中包含糖基化修飾的單克隆抗體制品，應(yīng)在成品檢定中對(duì)供試品的糖基化進(jìn)行檢測(cè)和控制。采用適宜的方法測(cè)定，如毛細(xì)管電泳（CE）或高效液相色譜（HPLC）等方法，供試品測(cè)定結(jié)果應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。必要時(shí)應(yīng)將供試品與參比品進(jìn)行比較。
3.2 純度和雜質(zhì)
3.2.1 分子大小變異體
采用適宜的方法檢測(cè)供試品分子大小變異體，采用非還原型或還原型SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）或SDS-聚丙烯酰胺毛細(xì)管電泳（CE-SDS）、分子排阻色譜法（SEC）等方法，對(duì)單體、聚合體或片段進(jìn)行定量分析，如供試品具備Fc效應(yīng)子功能，則還需關(guān)注非糖基化重鏈的情況。供試品測(cè)定結(jié)果應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。
3.2.2 電荷變異體
采用適宜的方法檢測(cè)供試品電荷變異體，如cIEF、IEX-HPLC、疏水高效液相色譜（HIC-HPLC）、反相高效液相色譜（RP-HPLC）等方法，應(yīng)盡可能對(duì)不同電荷變異體組分進(jìn)行鑒別，并規(guī)定相應(yīng)的可接受標(biāo)準(zhǔn)。供試品測(cè)定結(jié)果應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。
3.2.3 制品相關(guān)雜質(zhì)
采用適宜的方法對(duì)供試品氧化產(chǎn)物、脫酰胺產(chǎn)物或其他結(jié)構(gòu)不完整分子進(jìn)行定量分析。供試品測(cè)定結(jié)果應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。
3.2.4 工藝相關(guān)雜質(zhì)
采用適宜的方法對(duì)供試品宿主蛋白質(zhì)、宿主細(xì)胞和載體DNA、蛋白A及其他工藝相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。供試品測(cè)定結(jié)果應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。
3.3 效價(jià)
3.3.1 生物學(xué)活性
依據(jù)單克隆抗體預(yù)期、潛在的作用機(jī)制和工作模式（可能不限于一種），采用相應(yīng)的生物學(xué)測(cè)定方法和數(shù)據(jù)分析模式，并將供試品與標(biāo)準(zhǔn)品/參考品進(jìn)行比較。供試品測(cè)定結(jié)果應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。
3.3.2 結(jié)合活性
依據(jù)單克隆抗體預(yù)期的作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制，采用相應(yīng)的結(jié)合活性測(cè)定方法和數(shù)據(jù)分析模式，并將供試品與參比品進(jìn)行比較。供試品測(cè)定結(jié)果應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。
3.4 含量
根據(jù)制品質(zhì)量屬性建立品種特異的含量測(cè)定方法，如確定供試品280nm的特異消光系數(shù)，采用分光光度法進(jìn)行總蛋白質(zhì)含量測(cè)定，并建議采用第二種含量測(cè)定的絕對(duì)溯源方法進(jìn)行驗(yàn)證。供試品測(cè)定結(jié)果應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。
3.5 其他檢定
3.5.1 外觀及性狀
凍干粉應(yīng)為白色、類白色或淡黃色餅狀疏松體。注射液或復(fù)溶的凍干粉其澄明度和顏色檢查應(yīng)符合相關(guān)制品的要求。除另有規(guī)定外，不應(yīng)存在肉眼可見的不溶性顆粒。
3.5.2 復(fù)溶時(shí)間
根據(jù)規(guī)定的取樣量，加入標(biāo)示量體積的溶劑，凍干粉應(yīng)該在限定的時(shí)間里完全溶解，平均和最長(zhǎng)的溶解時(shí)間均應(yīng)符合規(guī)定。
3.5.3 pH值
依法測(cè)定（通則0631），應(yīng)符合規(guī)定。
3.5.4 滲透壓摩爾濃度
依法測(cè)定（通則0632），應(yīng)符合規(guī)定。除另有規(guī)定外，不低于240mOsmol/kg，對(duì)稀釋使用的樣品也適用。
3.5.5 裝量/裝量差異
除另有規(guī)定外，應(yīng)符合裝量檢查（通則0102）或裝量差異檢查（通則0102）的規(guī)定。
3.5.6 不溶性微粒檢查
依法檢查（通則0903）。除眼用制劑或另有規(guī)定外，每瓶≥10μm的顆粒不超過6000個(gè)，每瓶≥25μm的顆粒不超過600個(gè)。
3.5.7 可見異物檢查
除另有規(guī)定外，依法檢查（通則0904），應(yīng)符合規(guī)定。
3.5.8 水分
依法測(cè)定（通則0832），除另有規(guī)定以外，凍干粉殘留水分應(yīng)不高于3.0%。
3.5.9 無(wú)菌檢查
采用薄膜過濾法檢查（通則1101），應(yīng)符合規(guī)定。
3.5.10 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查
依法檢查（通則1143），應(yīng)符合規(guī)定。
3.5.11 異常毒性檢查
除另有規(guī)定外，應(yīng)進(jìn)行異常毒性檢查（通則1141）并符合規(guī)定。
3.6 修飾抗體的檢測(cè)
根據(jù)所修飾抗體的類型、修飾特性，采用適合的方法進(jìn)行檢測(cè)，或與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行比較，對(duì)修飾效果、比率或相關(guān)特殊的工藝雜質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，供試品測(cè)定結(jié)果應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。
4 保存、運(yùn)輸及有效期
應(yīng)符合“生物制品分包裝及貯運(yùn)管理”規(guī)定，成品應(yīng)在適合的環(huán)境條件下貯存和運(yùn)輸。自生產(chǎn)之日起，按批準(zhǔn)的有效期執(zhí)行。
5 標(biāo)簽
應(yīng)符合“生物制品分包裝及貯運(yùn)管理”要求和國(guó)家相關(guān)規(guī)定，標(biāo)簽標(biāo)示內(nèi)容至少應(yīng)包括：
?。?）每瓶或每1ml 的活性單位（如必要）；
?。?）每瓶單克隆抗體含量或蛋白質(zhì)含量；
?。?）每瓶標(biāo)示體積；
?。?）凍干制劑復(fù)溶液體的名稱、體積及復(fù)溶后的使用期限；
（5）使用前進(jìn)行適量稀釋（如果需要）；
（6）有效期。
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