氯霉素檢測
氯霉素檢測試劑盒可定性、定量檢測動物組織（含水產(chǎn)）、牛奶、蜂蜜、飼料、雞蛋等樣品中氯霉素的殘留
一、概要
氯霉素 （Chloramphenicol,CAP）曾是應用廣泛的抗菌素，但由于其存在嚴重的副作用，能引起人的再生障礙性貧血，粒細胞缺乏癥等疾病，歐美等發(fā)達國家已相繼禁止或嚴格禁止使用。
氯霉素檢測試劑盒是應用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代藥物殘留檢測產(chǎn)品，操作時間僅需45min，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。
二、試驗原理
氯霉素檢測試劑盒采用直接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被氯霉素抗體，樣品中殘留的氯霉素和酶標氯霉素抗原競爭微孔條上預包被的抗體，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光值與其殘留物氯霉素的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中氯霉素的含量。
三、交叉反應率
氯霉素………………………………………………………100％
氯霉素堿……………………………………………………0.5％
甲基氯霉素……………………………………………≤0.05％
氟苯尼考…………………………………………………<0.01%
氟苯尼考胺………………………………………………<0.1%
*注：標準品濃度為0ppb,0.05ppb,0.15ppb,0.45ppb,1.35ppb,4.05ppb
四、操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣品/標準品對應微孔按序編號，并記錄標準孔和樣品孔所在的位置。
5、加標準品/樣品：加標準品/樣品70l到對應的微孔中，再加入氯霉素酶標物30l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應15～20min。
8、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定)。
五、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.05ppb
樣品最低檢測限：
組織樣品……………………………………………0.1ppb
牛奶………………………………………………0.05ppb
飼料……………………………………………0.2ppb
蛋…………………………………………………………0.05ppb
蜂蜜…………………………………………………0.05ppb
回收率：
組織樣品……………………………………………… 102±15%
牛奶………………………………………………… 110±10%
飼料………………………………………………………93±10%
蛋………………………………………………………95±15%
蜂蜜………………………………………………………80±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%
六、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件:保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應時間。
9、該試劑盒最佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
七、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。
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