自然殺傷細(xì)胞(NK)及功能的檢測
?? NK細(xì)胞表面至少存在CD2、CD11b、CD11c、CD16、CD56和CD69等多種抗原,但均非NK細(xì)胞所特有,因此極少以CD系列抗原為指標(biāo)鑒定和計數(shù)NK細(xì)胞,現(xiàn)多檢測NK細(xì)胞活性,因NK細(xì)胞具有細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用,它能直接殺傷靶細(xì)胞。測定人NK細(xì)胞活性多以K562細(xì)胞株作為靶細(xì)胞,而測小鼠NK細(xì)胞活性則用YAC細(xì)胞株,檢測方法多種多樣。
1.形態(tài)法:將效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞按一定比例混合溫育,繼用臺盼藍(lán)或伊紅Y等活細(xì)胞拒染的染料處理,然后分別計數(shù)著染的死細(xì)胞和不著染的活細(xì)胞,推算NK細(xì)胞活性。
2.酶釋放法:將效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞按一定比例混合溫育,離心沉淀,取上清液檢測靶細(xì)胞遭破壞后釋放出的酶含量。
3.熒光法:用熒光素標(biāo)記靶細(xì)胞,經(jīng)與效應(yīng)細(xì)胞共溫后,離心去上清,用熒光計檢測剩余的活靶細(xì)胞的熒光。
4.核素法:將效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞按一定比例混合共溫后,離心檢測上清液或剩余靶細(xì)胞放射性的量,間接反映其活性。方法有靶細(xì)胞胞漿釋放法和胞核釋放法兩種。
5.化學(xué)發(fā)光法:當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞接觸時,效應(yīng)細(xì)胞呼吸暴發(fā),生成極不穩(wěn)定的O2-及OH-,放出光子,在發(fā)光劑存在條件下,可被光電倍增管接受和計數(shù),發(fā)光量與NK細(xì)胞殺傷能力相關(guān)。