關(guān)于流式細(xì)胞儀的熒光信號的介紹
在實際使用中，儀器首先要對光散射信號進(jìn)行測量。當(dāng)光散射分析與熒光探針聯(lián)合使用時，可鑒別出樣品中被染色和未被染色細(xì)胞。光散射測量最有效的用途是從非均一的群體中鑒別出某些亞群。
熒光信號主要包括兩部分：①自發(fā)熒光，即不經(jīng)熒光染色細(xì)胞內(nèi)部的 熒光分子經(jīng)光照射后所發(fā)出的熒光；②特征熒光，即由細(xì)胞經(jīng)染色結(jié)合上的 熒光染料受光照而發(fā)出的熒光，其熒光強度較弱， 波長也與照射激光不同。自發(fā)熒光信號為噪聲信號，在多數(shù)情況下會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。在 免疫細(xì)胞化學(xué)等測量中，對于結(jié)合水平不高的熒光抗體來說，如何提高信噪比是個關(guān)鍵。一般說來，細(xì)胞成分中能夠產(chǎn)生的自發(fā)熒光的分子（例核黃素、 細(xì)胞色素等）的含量越高，自發(fā)熒光越強；培養(yǎng)細(xì)胞中死細(xì)胞/活細(xì)胞比例越高，自發(fā)熒光越強；細(xì)胞樣品中所含亮細(xì)胞的比例越高，自發(fā)熒光越強。
減少自發(fā)熒光干擾、提高信噪比的主要措施是：①盡量選用較亮的 熒光染料；②選用適宜的激光和濾片 光學(xué)系統(tǒng)；③采用電子補償電路，將自發(fā)熒光的本底貢獻(xiàn)予以補償。
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