SDS-PAGE電泳的基本原理
SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳原理
聚丙烯酰胺凝膠由丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯(lián)劑N，N’一亞甲基雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(AP)，N，N，N’，N’?四甲基乙二胺(TEMED)作用下，聚合交聯(lián)形成的具有網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)的凝膠，并以此為支持物進(jìn)行電泳。
聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據(jù)不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷的差異及分子大小的不同所產(chǎn)生的不同遷移率將蛋白質(zhì)分離成若干條區(qū)帶，如果分離純化的樣品中只含有同一種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)樣品電泳后，就應(yīng)只分離出一條區(qū)帶。
SDS為一種陰離子表面活性劑能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合形成密度相同的短棒狀復(fù)合物，不同分子量的蛋白質(zhì)形成的復(fù)合物的長度不同，其長度與蛋白質(zhì)分子量呈正相關(guān)，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。
因此，各種蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物在電泳時的遷移率，不再受原有電荷和分子形狀的影響，只是分子量的函數(shù)。這種電泳方法稱為SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱SDS—PAGE)。
由于SDS PAGE可設(shè)法將電泳時蛋白質(zhì)電荷差異這一因素除去或減小到可以忽略不計的程度，因此常用來鑒定蛋白質(zhì)分離樣品的純化程度，如果被鑒定的蛋白質(zhì)樣品很純，只含有一種具三級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)或含有相同分子量亞基的具四級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，那么 SDS—PAGE后，就只出現(xiàn)一條蛋白質(zhì)區(qū)帶。
SDS—PAGE可分為圓盤狀和垂直板狀、連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)采用垂直板狀不連續(xù)系統(tǒng)。所謂“不連續(xù)”指電泳體系由兩種或兩種以上的緩沖液、pH和凝膠孔徑等所組成。
