精品国产亚洲一区二区三区大结局,日韩国产码高清综合,国产精品丝袜综合区另类,久久午夜无码午夜精品

關(guān)注公眾號(hào)

關(guān)注公眾號(hào)

手機(jī)掃碼查看

手機(jī)查看

喜歡作者

打賞方式

微信支付微信支付
支付寶支付支付寶支付
×

HIV檢驗(yàn)技術(shù)的研究進(jìn)展

2021.5.22

【關(guān)鍵詞】 ?人類免疫缺陷病毒;聚合酶鏈反應(yīng);抗原

  [摘要] 艾滋病是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一種嚴(yán)重威脅人類身體健康的疾病。為有效遏止HIV的蔓延,除尋求更加有效的疫苗和治療藥物外,HIV早期診斷十分重要,其早期診斷主要靠實(shí)驗(yàn)診斷,包括病原學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等。

  [關(guān)鍵詞] 人類免疫缺陷病毒;聚合酶鏈反應(yīng);抗原

  Study the Progress of HIV Examine the Technique

? ? ? ? Abstract:AIDS is a severe disease threatening the human health and caused by HIV the ealy diagnosis plays the important role for prevent the AIDS spread besides the effective vaccine and the drug.Its diagnosis methodes mainly incude the immunology and Molecular Biology et.

  Key words:HIV;PCR;Antigen

  1981年美國(guó)發(fā)現(xiàn)世界首例艾滋病患者,1983年由美國(guó)人羅伯特加洛領(lǐng)導(dǎo)的研究小組成功分離出艾滋病毒(HIV),引起全世界對(duì)其進(jìn)行廣泛深入的研究。據(jù)聯(lián)合國(guó)艾滋病規(guī)劃署報(bào)道:截止2004年底,估計(jì)全球有HIV感染者3 940萬(wàn)人(3 590萬(wàn)~4 430萬(wàn));2004年,全球估計(jì)有490萬(wàn)(430萬(wàn)~640萬(wàn))新感染者,310萬(wàn)(280萬(wàn)~350萬(wàn))人死于艾滋病;而且每天有14 000人新感染HIV,給人類造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和社會(huì)危害。面對(duì)這一世界性溫疫,全世界科學(xué)家使出渾身解數(shù),尋找致病線索和治療藥物,而尋求更加特異、靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法是一項(xiàng)重要的基礎(chǔ)性研究。自1985年第一個(gè)艾滋病診斷試劑盒問世以來(lái),HIV檢測(cè)技術(shù)發(fā)生了巨大的變化,下面就此領(lǐng)域的研究進(jìn)展作一檢述。

  1 抗原檢測(cè)應(yīng)用

  免疫熒光法、ELISA法及放射免疫直接測(cè)HIV抗原,通常測(cè)P24抗原,由P24抗原出現(xiàn)于抗體出現(xiàn)之前,對(duì)窗口期感染的早期診斷有幫助意義,此法簡(jiǎn)便易行,還常用于細(xì)胞培養(yǎng)HIV的測(cè)定,抗HIV醫(yī)藥費(fèi)物療效的檢測(cè)及HIV感染者發(fā)展為艾滋病的動(dòng)態(tài)觀察。

  2 抗體檢測(cè)HIV抗體

  一般在感染4周后逐漸出現(xiàn),可延至終身,是人類重要的檢測(cè)指標(biāo),相比于近年來(lái)逐步發(fā)展起來(lái)的用免疫技術(shù)測(cè)定其感染因子,檢測(cè)HIV特異性抗體仍是診斷艾滋病的重要依據(jù)。

  2.1 HIV抗體檢測(cè)初篩實(shí)驗(yàn)

  2.1.1 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)

  ELISA法敏感性好且操作簡(jiǎn)便。目前酶免法測(cè)HIV抗體試劑已發(fā)展到第四代,市售試劑有美國(guó)的雅培、上??迫A、北京萬(wàn)泰等其敏感度幾乎100%,特異在98.1%~99.8%之間,并且適用于批量操作,缺點(diǎn)是有一定假陽(yáng)性。

  2.1.2 免疫熒光法(IFA)            

  是借助抗體反應(yīng)進(jìn)行熒光染色的診斷技術(shù),由于非特異熒光較難去除等缺點(diǎn),因而僅用于HIV抗體初篩,陽(yáng)性結(jié)果需經(jīng)確證實(shí)驗(yàn)證實(shí),該法操作簡(jiǎn)便、敏感性高、特異性比ELISA法高。

  2.1.3 凝集實(shí)驗(yàn)            

  具有不需任何設(shè)備,一步即可迅速得到結(jié)果的優(yōu)點(diǎn),敏感性和特異性與ELISA相近。缺點(diǎn)是有假陽(yáng)性,且價(jià)格昂貴,亦僅作初篩實(shí)驗(yàn)。

  2.1.4 在ELISA基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的金免疫滲濾實(shí)驗(yàn)(GIFA),GIFA始于1985年,最初以酶作為標(biāo)記物,1989年發(fā)展以膠體金為標(biāo)記物用于檢測(cè)艾滋病毒抗體的滲濾實(shí)驗(yàn)。1990年Oskiowicz等應(yīng)用硒作為標(biāo)記物建立了免疫層析實(shí)驗(yàn)。上述兩種方法具有快速、簡(jiǎn)單,不需要任何儀器設(shè)備,幾分鐘可用肉眼觀察結(jié)果的優(yōu)點(diǎn),目前在臨床檢測(cè)中已廣泛應(yīng)用。

  2.2 確證實(shí)驗(yàn)

  2.2.1 免疫印跡實(shí)驗(yàn)(WB)            

  WB是目前最特異、敏感的證實(shí)HIV感染的方法,也是國(guó)內(nèi)HIV確認(rèn)的首選方法。WB實(shí)驗(yàn)?zāi)軝z測(cè)到gp120、fp160、p66、p51、gp41、p31、p24和17Kda等抗原相應(yīng)的抗體。我國(guó)對(duì)于WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):HIV陽(yáng)性:至少有兩條env帶和至少一條env帶和p24帶同時(shí)出現(xiàn)。HIV陰性:無(wú)任何HIV抗體特異帶出現(xiàn)。HIV可疑:出現(xiàn)HIV抗體特異帶,但帶型不足以確認(rèn)陽(yáng)性者。WB實(shí)驗(yàn)操作較ELISA稍復(fù)雜,檢測(cè)需在確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。由于自身抗體的存在,該方法仍有假陽(yáng)性。

  2.2.2 條帶免疫印實(shí)驗(yàn)(LTA)            

  其原理和操作方法與WB實(shí)驗(yàn)基本相同,只有條膜來(lái)源和組成有所區(qū)別。檢測(cè)時(shí)信噪比高,本地清晰,無(wú)潛在假陽(yáng)性干擾,克服了WB實(shí)驗(yàn)中使用病毒裂解產(chǎn)物而可能產(chǎn)生的同相載體上某些重要抗原不足缺點(diǎn)。這類試劑特異性高,但也有可能由于病毒株所合成抗原決定篩部位發(fā)生突變致HIV抗體假陰性。唯一缺點(diǎn)是由于合成抗原不能糖基化,其立體構(gòu)象與天然抗原有一定差異,在一定程度上可能影響了模擬真實(shí)HIV抗原檢測(cè)抗體的能力。

  2.2.3 放射免疫沉淀實(shí)驗(yàn)            

  本法是將感染的H9細(xì)胞和35S蛋氨酸孵育,用去垢劑將細(xì)胞溶解,再用抗LgGA蛋白瓊脂糖去除有反應(yīng)性的人抗原,將上清液(含有病毒蛋白)與待測(cè)血清混合,如有HIV抗體,則同位素標(biāo)記的HIV蛋白與之結(jié)合產(chǎn)生沉淀。沉淀物用含有Cleland試劑的緩沖液和十二烷基硫酸(SDS)洗脫,即可將病毒抗原分離。然后病毒蛋白用放射自顯影鑒定,并同時(shí)用已知的分子標(biāo)記物比較。該方法敏感性和特異性比WB方法還高,但費(fèi)時(shí)多,技術(shù)難度大。

  3 核酸檢測(cè)

  3.1 原位雜交(insite hyrization) 

  指應(yīng)用特定的標(biāo)記探針以分子雜交法直接檢測(cè)標(biāo)本中的HIV病毒靶核酸,最初為放射性標(biāo)記,后來(lái)逐漸發(fā)展為酶標(biāo)記或化學(xué)發(fā)光試劑標(biāo)記。陽(yáng)性率較PCR稍低,隨著核酸擴(kuò)增技術(shù)的出現(xiàn),基因探針技術(shù)也失去了其應(yīng)用價(jià)值。

  3.2 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)的一種以核酸生物學(xué)為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)診斷技術(shù)            

  自1985年問世來(lái),已成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域最有價(jià)值的研究手段之一。運(yùn)用PCP技術(shù)對(duì)于闡明HIV的發(fā)病機(jī)制有極大價(jià)值,特別適用于新生兒感染的診斷。目前有兩種方法用于HIV感染的檢查:PCRDNA用于擴(kuò)增前病毒DNA以診斷HIV感染,PCRRNA:用逆轉(zhuǎn)錄PCR(PTPCR)法可檢出血漿中HIV基因組的存在。定量PCR檢測(cè)病毒載量主要有三種方法:bDNA、RTPCR及NASBA。bDNA是一種核酸檢測(cè)技術(shù)。它屬于信號(hào)擴(kuò)增:而RTPCR及NASBA檢測(cè)屬于靶擴(kuò)增。bDNA檢測(cè)中靶探針是與HIV基因組中的pol基因序列特異結(jié)合,此段序所有已知的HIV基因組中最保守的區(qū)域。RTPCR檢測(cè)是通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄(RT)及擴(kuò)增(PCR)完成特異擴(kuò)增HIVgag基因的一點(diǎn)長(zhǎng)為142bp的基因序列。由于每個(gè)樣本中QS的量已知,運(yùn)用公式算出HIVRNA拷貝數(shù)從而達(dá)到HIVRNA定量。NASBA檢測(cè)是通過(guò)核酸釋放提取(固有提取)、核酸擴(kuò)增(NASBA擴(kuò)增)及核酸檢測(cè)(ECL)檢測(cè)來(lái)完成對(duì)血漿血清中HIV病毒RNA的定量。PTPCA、NASBA屬于PCA方法,其中包括抽提RNA的步驟,所以比較受污染而使RNA降解的bDNA與RTPCR、NASBA有較好的穩(wěn)定性、線性和可重復(fù)性。薛以樂等通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較bDNA與NASBA兩處方法發(fā)現(xiàn)在檢測(cè)HIV病毒載量時(shí)具有高度一致性能,NASBA法在HIRNA低濃度時(shí)敏感更高,bDNA法則能測(cè)得更廣泛的亞型標(biāo)本。病毒載量定量檢測(cè)具有十分重要的臨床意義,Tetali等通過(guò)測(cè)定HIVRNA的濃度發(fā)現(xiàn)血漿中病毒載量度與疾病進(jìn)展和存活率通過(guò)bDNA和流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)血漿中病載量與CD4淋巴細(xì)胞存在明顯關(guān)系,呈負(fù)相關(guān)趨勢(shì),完全可作為HIV感染者觀察疾病病變的有效指標(biāo),尤其是HIV病毒載量更具敏感性。

  3.3 基困芯片應(yīng)用于HIV檢測(cè)得到迅速發(fā)展

  人類免疫缺陷病毒(HIV)PRT440也廣泛用于HIVI病毒的測(cè)序、分型及多態(tài)性分析。但由于該技術(shù)較為復(fù)雜,且成本高,目前對(duì)其應(yīng)用仍大多停留在實(shí)驗(yàn)階段,離臨床檢驗(yàn)及疾病診斷的普及性還有一段距離。綜上所述各種實(shí)驗(yàn)方法可以根據(jù)HIV感染的不同時(shí)期與狀態(tài)選擇不同的檢測(cè)手段。HIV原發(fā)感染2周內(nèi),任何方法均無(wú)法檢測(cè)到病毒,2周后出現(xiàn)病毒血癥時(shí),可檢測(cè)病毒抗原,感染6周~8周后可以選擇檢測(cè)抗體的方法。運(yùn)用PCR技術(shù)可用來(lái)追蹤HIV的自然感染史;可用來(lái)監(jiān)測(cè)長(zhǎng)期潛伏期(4 a~7 a)患者;以及在抗病毒治療期間的病毒載量水平;也可用于HIVI血清陽(yáng)性母親的嬰兒的HIV檢測(cè)。在嬰兒出生后最初6個(gè)月~9個(gè)月期間。他們的血清中存在母體的抗體,因此用PCR可判定嬰兒是否真正被HIV感染。就目前而言,標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法是血清學(xué)HIV抗體檢測(cè),它是診斷艾滋病感染者和艾滋病的主要指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)項(xiàng)目,分子生物芯片等更新檢測(cè)技術(shù)可能會(huì)廣泛應(yīng)用于HIV檢測(cè)我們應(yīng)密切注視檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展,以更準(zhǔn)確、快速的方法對(duì)HIV感染作出診斷。

  參考文獻(xiàn):

 ?。?]張卓然,倪語(yǔ)星.臨床微生物學(xué)和微生物檢驗(yàn)[J],2003:402405.

 ?。?]林嘉友,秦曉光.掌握抗體檢測(cè)的臨床意義與實(shí)驗(yàn)要求[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2000,3:133134.

 ?。?]Spiebrg F,Kabeya CM,Ryder RW,et al.Field testing and comparative evalution of rapid,visually read screening assays for antibody to human immunodeficieny virus[J].Lancet,1989,1:580584.

 ?。?]Brandt J,Andersson LO,porath J. Covalent attachment of proteins to polysaccharide carriers by means of benzogainome[J].Biochip Biophys Acta,1975,368:196202.

 ?。?]楊婧,張正.沙眼衣原體實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)發(fā)展[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,1999,4:251252.

  [6]Baumforth KR,Nelson PN,Digby J E,et al.demystified……the polymerase chain reaction[J].Mol pathol,1999,55:110.

 ?。?]薛以樂,鄭小虹.HIV病毒載量定量測(cè)定方法的比較研究[J].傷害預(yù)防醫(yī)學(xué),2001,13(7):306307,312.

 ?。?]Tettale S,Bakshi S,Than S,et al.plasma virus load evluation in relation to disease Progression in HIVinfected children[J]. Aids Res HumRetrorir,1998,14:571577.

 ?。?]方惠,薛以樂.HIV感染者病毒載量和CD4淋巴細(xì)胞的意義[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué),2001(007):203305.

 ?。?0]劉彥華,仝文斌.生物芯片技術(shù)及其應(yīng)用前景[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2000,3:177199.


推薦
關(guān)閉
国产一区二区与亚洲av| 97在线视频播放免费观看不卡| 欧美日韩一区二区三区自拍| 午夜精品人妻一区二区三区| 人人妻人人澡av天堂香蕉| 中文字幕精品资源站| 国产99青草视频在线播放视| 成人午夜日韩看片后入| 久久久久人妻精品明星换脸| 国产精品综合久久久久久| 欧美乱码精品一区二区三区卡| 花花草草寻亲记哪里看全集| 色综合久久久久综合激情| 中文字幕久久中文字幕综合网| 亚洲午夜精品久久久久久浪潮| 日韩在线中文字幕观看| 久久久久久精品免费看| 韩漫漫画在线免费看视频| 亚洲一道本中文字幕一区二区| 国产av一区二区三区久久久久| 在线电影日韩一区二区三区| 日韩在线|中文字幕| 精品天堂色吊丝一区二区| 国产精品一区二区30p| 日韩欧美精品在线中文字幕| 日本伊人久久精品视频| 欧美成人3p视频在线观看| 国产第一页久久亚洲| 欧美老熟女多毛茸茸| 精品国产免费一区二区久久| 国产黄色三级三级三级看三级| 亚洲一级二级中文字幕| 欧美日韩在线看免费看成人| 日韩精品欧美亚洲国产最大| 亚洲精品国产第一区三区| 日韩精品一区二区三区视频最新| 日韩精品一区二区av蜜桃| 久久亚洲国产精品五月天| 99精品国产一区二区青青性色| 国产精品久久小视频| 日本精品最新字幕一区二区|