藥物鑒別法--紅外光譜鑒別法
紅外光譜鑒別法是一種專屬性很強(qiáng)、應(yīng)用廣泛的方法,主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥,特別是結(jié)構(gòu)復(fù)雜、用其他常用方法不易區(qū)分的藥物,并且適用于固體、液體甚至是氣體的樣品鑒別。
應(yīng)用紅外光譜進(jìn)行鑒別試驗(yàn)時(shí),藥典采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法。在藥典規(guī)定的條件下測定供試品的圖譜,然后與國家藥典委員會(huì)編訂的《藥品紅外光譜集》對(duì)照。
《藥品紅外光譜集》分卷出版,分別為第一卷(1995年出版)、第二卷(2000年出版)、第三卷(2005年出版)、第四卷(2010年出版)。每次新版中收載的藥品紅外光譜圖包括新增品種和老品種重新繪制的圖譜。所以,如果同一化合物的圖譜在不同卷上均有收載時(shí),用于鑒別時(shí)以后卷圖譜作為比對(duì)依據(jù),前卷光譜圖僅作為參考。光譜圖中的橫坐標(biāo)為波數(shù)(cm-1),縱坐標(biāo)為透光率(T%)分辨率為2cm-1,基線一般控制在90%透光率以上,供試品取量一般控制在使其最強(qiáng)吸收峰在10%透光率以下。
原料藥的鑒別除另有規(guī)定外,應(yīng)按照《藥品紅外光譜集》各卷收載的各光譜圖所規(guī)定方法制備樣品。常用的制備方法有壓片法、糊法、膜法、溶液法、衰減全反射法和氣體法等。
組成相對(duì)穩(wěn)定的多組分原料藥鑒別不能采用全光譜比對(duì),需參照原料藥的標(biāo)準(zhǔn)光譜,在指紋區(qū)內(nèi)選擇主要成分的若干個(gè)特征譜帶作為鑒別的依據(jù)。
制劑鑒別應(yīng)按品種鑒別項(xiàng)下規(guī)定的前處理方法處理,通常是采用溶劑提取法。提取時(shí)應(yīng)選擇適宜的溶劑,盡可能減小輔料對(duì)鑒別結(jié)果的干擾,并且避免導(dǎo)致提取過程中藥物晶型的轉(zhuǎn)變。提取后的樣品經(jīng)適當(dāng)干燥后依法進(jìn)行鑒別。
在比對(duì)光譜時(shí)應(yīng)注意以下兒點(diǎn)。
(1)輔料無干擾,待測成分的晶型不變化時(shí),可直接與原料藥的標(biāo)準(zhǔn)光譜進(jìn)行比對(duì)。
(2)輔料無干擾,而待測成分的晶型有變化時(shí),可用對(duì)照品經(jīng)同法處理后的光譜比對(duì)。
(3)待測成分的晶型不變化,而輔料存在不同程度的干擾時(shí),可參照原料藥的標(biāo)準(zhǔn)光譜,在指紋區(qū)內(nèi)選擇3~5個(gè)不受輔料干擾的待測成分的特征譜帶作為鑒別的依據(jù)。鑒別時(shí),實(shí)測譜帶的波數(shù)誤差應(yīng)小于規(guī)定值的0.5%。
(4)待測成分的晶型有變化,輔料也存在干擾,此種情況一般不宜采用紅外光譜鑒別。
對(duì)照時(shí)一般先看最強(qiáng)峰的吸收位置、形狀、數(shù)目等是否一致,然后再檢查中等強(qiáng)度峰和弱吸收峰是否對(duì)應(yīng),如果供試品的紅外光吸收?qǐng)D譜與對(duì)照品的圖譜完全一致,一般可認(rèn)為是同一種化合物(只有少數(shù)例外,如有些光學(xué)異構(gòu)體或大分子同系物等)。若兩光譜圖不同,則可判定兩化合物不同。但是在實(shí)際操作中由于繪制圖譜時(shí)受藥物粉末細(xì)度、吸水程度、試樣的處理和制備等多種外界條件的影響較大,圖譜易發(fā)生變異,因此在圖譜對(duì)照時(shí),要充分考慮各種因素可能造成的影響。
藥典一般不單獨(dú)用本法進(jìn)行鑒別,常與其他理化方法聯(lián)合進(jìn)行鑒別。
如硫酸阿托品鑒別項(xiàng)下規(guī)定:①本品(試樣制備:KBr壓片法)的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜(《藥品紅外光譜集》一致;②本品顯托烷生物堿類的鑒別反應(yīng);③本品的水溶液顯硫酸鹽的鑒別反應(yīng)。
