蛋白酶的活力測(cè)定方法介紹
蛋白酶的種類繁多,不同的蛋白酶的性質(zhì)和催化反應(yīng)條件各不相同,無(wú)法規(guī)定一個(gè)統(tǒng)一的測(cè)定方法,目前使用最多的有福林—酚法、紫外分光光度法、甲醛滴定法、DHT-酪蛋白法。
1 福林酚法
蛋白酶催化蛋白質(zhì)水解成氨基酸,其中含酚基的氨基酸(色氨酸、酪氨酸)與福林試劑反應(yīng),生成藍(lán)色復(fù)合物,藍(lán)色深淺與含酚基氨基酸的多少成正比,以此來(lái)測(cè)定酶的活力。
2 甲醛滴定法
蛋白酶催化蛋白質(zhì)水解成氨基酸,再用甲醛固定氨基酸的氨基,用0.1mol/LNaOH溶液滴定生成的氨基酸,從而測(cè)定其酶活。
3 DHT-酪蛋白法
用5-氨基四唑重氮鹽將酪氨酸中部分組氨酸和酪氨酸重氮化,得到黃色的重氮5-氨基四唑酪蛋白(DHT-酪蛋白)。以DHT-酪蛋白為底物,在蛋白酶作用下,水解生成DHT-肽,二價(jià)離子可與DHT-蛋白與DHT-肽形成穩(wěn)定的可溶性紅色螯合物,而鋅離子可迅速沉淀DHT-酪蛋白,但不沉淀DHT-肽。選用合適濃度的鋅離子和鎳離子作為沉淀劑和顯色劑,利用比色法可測(cè)定蛋白酶活力。
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