氯霉素的鑒別檢查方法
鑒別
(1)取本品10mg,加稀乙醇1ml溶解后,加1%氯化鈣溶液3ml與鋅粉50mg,置水浴上加熱10分鐘,傾取上清液,加苯甲酰氯約0.1ml,立即強(qiáng)力振搖1分鐘,加三氯化鐵試液0.5ml與三氯甲烷2ml,振搖,水層顯紫紅色。如按同一方法,但不加鋅粉試驗(yàn),應(yīng)不顯色(2)在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中,供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致(3)本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜(光譜集507圖)一致
檢查
結(jié)晶性取本品少許,依法檢查(通則0981),應(yīng)符合規(guī)定。酸堿度取本品,加水制成每1m中含25mg的混懸液,依法測(cè)定(通則0631),pH值應(yīng)為4.5~7.5。有關(guān)物質(zhì)照高效液相色譜法(通則0512)測(cè)定。供試品溶液取本品適量,精密稱定,加甲醇適量(每0mg氯霉素加甲醇1m)使溶解后,用流動(dòng)相定量稀釋制成每1m中含0.5mg的溶液雜質(zhì)對(duì)照品溶液取氯霉素二醇物對(duì)照品與對(duì)硝基苯甲醛對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇適量(每10mg氯霉素二醇物加甲醇1ml)使溶解,用流動(dòng)相定量稀釋制成每1ml中含氯霉素二醇物5μg與對(duì)硝基苯甲醛3g的混合溶液。系統(tǒng)適用性溶液取氯霉素對(duì)照品、氯霉素二醇物對(duì)照品與對(duì)硝基苯甲醛對(duì)照品各適量,加甲醇適量(每10mg氯霉素加甲醇1m使溶解,用流動(dòng)相稀釋制成每1ml中各含50μg的溶液。色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0.0lmol/L庚烷磺酸鈉緩沖溶液(取磷酸二氫鉀6.8g,用0. imol/L庚烷磺酸鈉溶液溶解并稀釋至100m,再加三乙胺5ml,混勻,用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5)-甲醇(68:32)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm;進(jìn)樣體積為10l系統(tǒng)適用性要求系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中,各相鄰峰之間的分離度均應(yīng)符合要求。測(cè)定法精密量取供試品溶液與雜質(zhì)對(duì)照品溶液,分別注人液相色譜儀,記錄色譜圖限度按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,含氯霉素二醇物不得過(guò)1.0%,含對(duì)硝基苯甲醛不得過(guò)0.5%。殘留溶劑照殘留溶劑測(cè)定法(通則0861第二法)測(cè)定。供試品貯備液取本品約0.5g,精密稱定,置10ml量瓶中,加二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度,搖勻。供試品溶液精密量取供試品貯備液2ml置頂空瓶中再精密加二甲基亞砜1ml,搖勻,密封對(duì)照品貯備液取氯苯約36mg、乙醇約500mg,精密稱定,置100ml量瓶中,加二甲基亞砜稀釋至刻度,搖勻。對(duì)照品溶液精密量取對(duì)照品貯備液1m1置頂空瓶中,精密加供試品貯備液2ml,搖勻,密封。系統(tǒng)適用性溶液精密量取對(duì)照品貯備液1m1置頂空瓶中,再精密加二甲基亞砜2ml,搖勻,密封。色譜條件以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷(或極性相近)為固定液的毛細(xì)管柱為色譜柱,起始溫度為40℃,維持10分鐘,再以每分鐘10℃的速率升至200℃,維持4分鐘;進(jìn)樣口溫度為250℃;檢測(cè)器溫度為300℃;頂空瓶平衡溫度為85℃,平衡時(shí)間為45分鐘。系統(tǒng)適用性要求系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中,洗脫順序依次為:乙醇、氯苯,各色譜峰之間的分離度應(yīng)符合要求;對(duì)照品溶液色譜圖中,計(jì)算數(shù)次連續(xù)進(jìn)樣結(jié)果,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得過(guò)5.0%測(cè)定法取供試品溶液與對(duì)照品溶液分別頂空進(jìn)樣,記錄色譜圖。限度按標(biāo)準(zhǔn)加人法以峰面積計(jì)算,乙醇與氯苯的殘留量均應(yīng)符合規(guī)定干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,減失重量不得過(guò)0.5%(通則0831)熾灼殘?jiān)坏眠^(guò)0.1%(通則0841)
