酶的固定化方法有哪些
一、包埋法
定義：將酶、細胞或原生質(zhì)體包埋在各種多孔載體中，使其固定化的方法。
分類：根據(jù)載體的材料和方法的不同分為凝膠包埋法（網(wǎng)格型包埋法）、半透膜包埋法（微囊型包埋法）。
1、凝膠包埋法：應(yīng)用最廣泛的固定化方法。
定義：以各種多孔凝膠為載體，將酶、細胞或原生質(zhì)體包埋在凝膠的微孔內(nèi)的固定化方法。
載體：瓊脂凝膠、海藻酸鈣凝膠、角叉菜膠、明膠、聚丙烯酰胺凝膠等。
注意事項：凝膠的孔徑應(yīng)控制在小于酶分子直徑的范圍內(nèi)；不適于那些底物或產(chǎn)物分子很大的酶類的固定化。
2、半透膜包埋法
定義：將酶或細胞包埋在由各種高分子聚合物制成的小球內(nèi)，制成固定化酶或固定化細胞。
載體：聚酰胺膜、火棉膠膜等。 適用：底物和產(chǎn)物都是小分子物質(zhì)的酶的固定化。
方法：將酶液滴分散在與水互不相溶的有機溶劑中，在酶液滴表面形成半透膜，將酶包埋在微膠囊中。
二、結(jié)合法
定義：選擇適宜的載體，使之通過共價鍵或離子鍵與酶結(jié)合在一起的固定化方法。
分類：根據(jù)酶與載體結(jié)合的化學(xué)鍵不同分為離子鍵結(jié)合法、共價鍵結(jié)合法。
1、離子鍵結(jié)合法
定義：通過離子鍵使酶與載體結(jié)合的固定化方法。
載體：某些不溶于水的離子交換劑，如DEAE-纖維素、DEAE-葡聚糖凝膠。
方法：一定條件下，酶與載體混合攪拌幾小時，或是將酶液緩緩流過處理好的離子交換柱。
特點：結(jié)合力較弱，在pH、離子強度等條件改變時，酶容易脫落。
使用注意：pH、離子強度、溫度等的控制。
2、共價鍵結(jié)合法
定義：通過共價鍵將酶與載體結(jié)合的固定化方法。
常用載體：纖維素、葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠等
可以形成共價鍵的基團：氨基、羧基、巰基、羥基、酚基和咪唑基等。
特點：結(jié)合牢固、酶不會脫落、可連續(xù)使用較長時間；載體活化的操作復(fù)雜；共價結(jié)合可能影響酶的空間結(jié)構(gòu)，從而影響酶的催化活性。
