C280成像系統(tǒng)在EtBr、SYBR Green、考馬斯藍(lán)和銀染蛋白膠成像...
C280成像系統(tǒng)在EtBr、SYBR Green、考馬斯藍(lán)和銀染蛋白膠成像中的應(yīng)用
Azure Biosystems c系列數(shù)字成像系列產(chǎn)品是行業(yè)領(lǐng)先產(chǎn)品，用戶界面友好、應(yīng)用靈活。 在本應(yīng)用中，我們展示了一些可以在c系列家族最新成員Azure Biosystems c280上完成的新應(yīng)用。
簡(jiǎn)介
Azure Biosystems c280數(shù)字成像儀是數(shù)字化學(xué)發(fā)光成像的理想切入點(diǎn)。 然而，其優(yōu)點(diǎn)并不止于此，具有雙波長(zhǎng)302nm和365nm紫外的c280用于溴化乙錠（EtBr）DNA凝膠的成像；使用EPI藍(lán)光LED 用于“安全”DNA染料SYBR Green等的成像；RGB混合白光光源用于考馬斯藍(lán)，銀染蛋白膠等的成像。
C280的用戶界面友好，自動(dòng)聚焦，軟件控制光源和濾光片選擇使成像變得更容易。
材料和方法
DNA凝膠
通過凝膠電泳分離進(jìn)行系列稀釋的東升生物技術(shù)公司100bp Ladder Plus。使用預(yù)先EtBr染色的凝膠或用SYBR Green后染色的凝膠，使用紫外透射儀（302nm）或EPI藍(lán)光在Azure Biosystems c280數(shù)字成像儀上采集圖像。
考馬斯亮藍(lán)染色的凝膠
一系列純化的轉(zhuǎn)鐵蛋白進(jìn)行稀釋，使用4-15%的Tris-Glycine凝膠進(jìn)行稀釋，考馬斯亮藍(lán)染料進(jìn)行染色，使用AzureC280 RGB混合光源進(jìn)行成像采集成像。
化學(xué)發(fā)光+可見彩色Marker成像
純化的轉(zhuǎn)鐵蛋白經(jīng)過一系列的稀釋從500pg-61fg，使用SDS-PAGE電泳進(jìn)行分離，蛋白分離后使用Azure轉(zhuǎn)印buffer轉(zhuǎn)印到低熒光背景膜上，進(jìn)行封閉，孵育?chicken-anti-transferrin 的一抗，漂洗，孵育goat-anti-chicken HRP 的二抗；所有的稀釋液使用Azure Chemi Blot Blocking
Buffer.使用Azure Radiance chemiluminescent 底物液，成像使用C280化學(xué)發(fā)光模塊進(jìn)行采集并與彩色marker進(jìn)行整合。
結(jié)果和討論
在這個(gè)應(yīng)用中，Azure Biosystems c280數(shù)字成像儀應(yīng)用更靈活。 DNA凝膠結(jié)果顯示在圖1中 - A）EB使用紫外302nm成像，B）SYBR Green染色的類似凝膠用Epi Blue成像。
圖1.DNA凝膠使用EB和SYBR染料進(jìn)行染色A）EB染色的凝膠使用UV302nm進(jìn)行成像 B）SYBR Green染色的DNA凝膠，使用RGB混合白光光源進(jìn)行成像，圖中方框展示的是78pg的濃度
圖2顯示了代表性考馬斯藍(lán)染色的蛋白質(zhì)凝膠。 Azure Biosystems c280數(shù)字成像儀具有高分辨率CCD，自動(dòng)圖像采集協(xié)議。 可見成像模式直接獲取彩色圖像，對(duì)比更明顯。
圖2：考馬斯亮藍(lán)染色的凝膠，純化的轉(zhuǎn)鐵蛋白經(jīng)過一系列的稀釋從5000ng-5ng，使用4-15%的Tris-Gly凝膠進(jìn)行分離，使用考馬斯亮藍(lán)染液進(jìn)行染色，方框展示的是10ng的蛋白。
最后，圖3顯示了數(shù)字化學(xué)發(fā)光圖像與可見光彩色marker整合圖，允許精確的分子量分析。
圖3.化學(xué)發(fā)光-可見光整合成像，純化的轉(zhuǎn)鐵蛋白經(jīng)過500pg-61pg一系列稀釋，使用化學(xué)發(fā)光 western blot進(jìn)行檢測(cè)，C280化學(xué)發(fā)光和可見彩色Marker同時(shí)成像進(jìn)行整合。
言之，Azure Biosystems公司的c280是多功能多應(yīng)用成像儀，可以簡(jiǎn)化大量常用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。 以其經(jīng)濟(jì)的價(jià)格，和易用性，C280化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)是您實(shí)驗(yàn)室理想選擇。
