關(guān)于聚合酶鏈反應(yīng)引物的量和TaqDNA聚合酶的量的介紹
（一）引物的量
引物在PCR反應(yīng)中的濃度一般在0.1～1μmol/L之間。濃度過(guò)高易形成引物二聚體且產(chǎn)生非特異性產(chǎn)物。一般來(lái)說(shuō)用低濃度引物經(jīng)濟(jì)、特異，但濃度過(guò)低，不足以完成30個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增反應(yīng)，則會(huì)降低PCR的產(chǎn)率。
?。ǘ㏕aqDNA聚合酶的量
典型PCR反應(yīng)混合物中，所用酶濃度為2.5U/μl，常用范圍為1～4U/100μl。由于DNA模板的不同和引物不同，以及其它條件的差異，多聚酶的用量亦有差異，酶量過(guò)多會(huì)導(dǎo)致非特異產(chǎn)物的增加。
由于生產(chǎn)廠家所用兵配方、制造條件以及活性定義不同，不同廠商供應(yīng)的TaqDNA聚合酶性能也有所不同。
Cetus公司酶定義是：1個(gè)酶單位是指在以下分析條件下，于74℃，30min內(nèi)使10nmmol的dNTP摻入酸不溶性成分所需的酶。測(cè)定時(shí)間為10min，折算成30min摻入量。
分析條件為25nmol/L TAPS（三羥基-甲基-氨基丙烷磺酸鈉pH9.3.25℃），50mmol/l KCl，2mmol/L MgCl2.1mmol/L β-ME（巰基乙醇），dATP、dTTP、dGTP各200mmol/L，dCTP為100mmol/L(由不標(biāo)記及α-32P標(biāo)記混合)，12.μg變性鯡魚精子DNA，最終體積50μl。
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