外泌體蛋白組學服務中外泌體提取方式介紹
外泌體作為機體天然信息傳遞的載體在細胞間通信中發(fā)揮著重要作用，其頻繁穿梭于細胞之間，為細胞之間的通信提供了橋梁，成為疾病標志物、疾病機理、藥物開發(fā)等研究的創(chuàng)新熱點。由于蛋白質是外泌體的重要組成成分，研究發(fā)現(xiàn)外泌體蛋白不僅影響細胞的生理狀態(tài)，而且還與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展密切相關，分析外泌體蛋白組成有助于推動外泌體功能的研究，基于質譜的蛋白質組學的技術為外泌體蛋白組研究提供了技術保障。
研究外泌體蛋白組，主要包含三個步驟，①外泌體提取純化和表征。②利用質譜的技術鑒定外泌體蛋白組成。③外泌體蛋白組數(shù)據(jù)分析。外泌體蛋白組的研究離不開對外泌體分離純化，這也是關鍵的一個步驟，現(xiàn)對第一點進行總結。
外泌體蛋白組研究中目前常用的外泌體提取方法有：超高速離心、密度梯度離心、免疫親和方法、尺寸排阻色譜法、聚合沉淀法等技術。不同的外泌體提取方法各有優(yōu)越點，而外泌體蛋白組學研究中對外泌體的純度要求高，不純的外泌體會引入大量雜蛋白，掩蓋囊泡蛋白的真實信號，進而導致檢測到的蛋白數(shù)量少。華盈生物開發(fā)了一套完整的外泌體蛋白質組學研究技術服務體系，針對不同類型的樣本分別采用專屬的外泌體提取方法，如超速離心、尺寸排阻等。
一、外泌體提取——超速離心法
? ? ? 超速離心法是最常用的外泌體提取方法之一，該方法通過多次離心步驟來分離和純化外泌體。首先，通過低速離心去除細胞碎片和大顆粒物質。然后，通過高速離心將外泌體沉淀。最后，用緩沖液重懸外泌體沉淀，得到純凈的外泌體樣品。超速離心法提取的外泌體通常具有較高的純度且操作簡便，無需特殊試劑，且文獻引用較多，是目前的外泌體領域的分離“金標準”。廈門大學一科研團隊在外泌體專業(yè)刊物Journal of Extracellular Vesicles上發(fā)表文章，報道了基于納米流式細胞儀的分析策略，對常見的外泌體提取策略進行外泌體純度和富集效率的評估，并證實超速離心相對是分離純度最好的外泌體提取方法。
二、外泌體提取——qEV尺寸排阻分離柱
? ? ? ?qEV尺寸排阻分離柱是由新西蘭IZON公司研發(fā)和生產(chǎn)的一種基于尺寸排阻法色譜法（Size Exclusion Chromatography, SEC）原理的外泌體分離-純化技術。該技術具有簡便、快速、容易標準化操作的特點，只需要15min就可以從多種類型樣本中提取到完整的高純度外泌體。并且相較于其他方法，qEV外泌體提取所提取的外泌體純度更高、濃度更高、活性也更高，還可以重復使用，尤其適用于外泌體蛋白組研究。在緩沖液的作用下，較大粒徑的囊泡（外泌體）流速快，在特定的階段會被洗脫出來進入樣品收集管，成為實驗樣品。此技術有效避免了超速離心和密度梯度離心等傳統(tǒng)方法分離囊泡（外泌體）時，由于超高離心力與蔗糖溶液高粘性造成的HDL蛋白或囊泡的聚集污染，也避免了傳統(tǒng)方法對于囊泡（外泌體）的膜結構的損傷，使其保留完整的生物活性，并且適用于多種類型樣品的外泌體提取。有研究文獻通過高分辨質譜分析，比較了SEC和UTC分離的血漿外泌體，發(fā)現(xiàn)相較于超離，SEC得到的外泌體蛋白鑒定數(shù)量更多，比超離UTC更適合進行血漿外泌體蛋白組學分析。
三、外泌體提取——EIQ3試劑盒法
? ? ? ?經(jīng)典的超速離心法（差速離心）、密度梯度離心法在外泌體提取過程中經(jīng)常受到大型儀器的資源限制，并且操作復雜、耗時、外泌體得率也低。華盈生物自主研發(fā)的Exosome Isolation Q3（簡稱EIQ3）系列沉淀法外泌體提取試劑盒，不僅有效提高外泌體得率，同時經(jīng)過技術改良，能夠顯著減少雜蛋白殘留（如血清高豐度蛋白）。如果樣本較少，推薦用試劑盒法做，該試劑盒可以實現(xiàn)血清、血漿、尿液、細胞上清等液質樣本中外泌體的快速提取，為后期外泌體研究的數(shù)據(jù)穩(wěn)定性和可靠性提供保障。
? ? ? ?具體的研究需求，可以選擇合適的外泌體提取方法來獲得純凈的外泌體樣品，如結合超速離心法或者尺寸排阻法進行外泌體提取從而開展外泌體蛋白組學研究。
