革蘭氏染色的步驟和原理
原理：革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）兩大類，是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別染色法。該染色法之所以能將細(xì)菌分為G+菌和G-菌，是因?yàn)橐话阏J(rèn)為革蘭氏染色是基于細(xì)菌細(xì)胞壁特殊化學(xué)組分進(jìn)行染色的。
步驟：
(一)涂片固定
在干凈的載玻片中央滴加一滴蒸餾水，用接種環(huán)進(jìn)行無菌操作，挑取培養(yǎng)物少許，置載玻片的水滴中，與水混合做成菌懸液并涂布成直徑約1cm的薄層。
(二)染色
在固定過的涂片菌膜上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染色液應(yīng)完全覆蓋整個(gè)菌膜，染色1min。
(三)水洗
染色到一定的時(shí)間，拿住玻片使之成450角，用細(xì)小的水流把多余的染料沖洗掉，被菌體吸附的染料則保留。
(四)媒染
加碘液覆蓋涂面染1 min。在媒染處理時(shí)，媒染劑與染料形成不溶性的化合物，可增加染料和細(xì)菌的親和力。
(五)水洗，用吸水紙吸去水分
用細(xì)小的水流緩慢沖洗涂片上的染色液，用吸水紙吸干。
(六)脫色
加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色， 20 s~30 s后再進(jìn)行水洗，吸去水分。
(七)復(fù)染
蕃紅染色液染色10 s后， 自來水沖洗。
(八)干燥，鏡檢
染色的結(jié)果，革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色，負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色。
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