凝集反應(yīng)實驗原理和方法（直接凝集反應(yīng)和間接凝集...(1)
凝集反應(yīng)是指細菌、紅細胞等顆粒性抗原或表面覆蓋抗原的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在的條件下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。
一、直接凝集反應(yīng)
顆粒性抗原（如細菌、紅細胞等）直接與相應(yīng)特異性抗體結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在條件下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱直接凝集反應(yīng)。參加凝集反應(yīng)的抗原稱為凝集原，而抗體則稱為凝集素。直接凝集反應(yīng)有玻片法和試管法兩類。
（一）玻片凝集反應(yīng)
在玻片上進行的直接凝集反應(yīng),主要用于抗原的定性分析,數(shù)分鐘之內(nèi)便可觀察結(jié)果,快速、簡便。常用于細菌的分型鑒定,也用于ABO血型的測定。
【 實驗材料 】
（ 1）抗原：受檢菌液或受檢者的血細胞鹽水懸液。
（ 2）抗體：用于細菌鑒定的1：20稀釋診斷血清。
血型檢測的A及B診斷血清。
（ 3）生理鹽水、玻片、吸管、接種環(huán)。
【 實驗方法 】
（ 1）于潔凈玻片的一端加診斷血清1滴，另一端加生理鹽水1滴作陰性對照。
（ 2）用接種環(huán)取待檢菌液或血細胞懸液分別涂于診斷血清和生理鹽水，混勻。
（ 3）輕搖玻片，靜置數(shù)分鐘，觀察結(jié)果。
【 結(jié)果分析 】
玻片上抗原凝集成肉眼可見的小團塊狀或絮狀凝集物，其周圍液體澄清，為陽性反應(yīng)。陰性反應(yīng)和生理鹽水對照均不發(fā)生凝集，為均勻混濁的乳狀液。
【 注意事項 】
細菌鑒定時，特別是腸道菌種的沙門菌屬或志賀菌屬，原則上先用多價診斷血清檢測，如為陽性，再用單價診斷血清進行分群或定型。血型測定時，室溫需保持在 20oC左右，若低于10oC，易出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象而造成假陽性的錯誤診斷。
（二）試管凝集反應(yīng)
是用定量的顆粒性抗原懸液與一系列倍比稀釋的待檢血清在試管中進行的凝集反應(yīng)，根據(jù)試驗結(jié)果判定待檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價，對血清中抗體進行半定量分析。此法目前仍常用于某些病原微生物感染的免疫學(xué)診斷，例如，診斷傷寒和副傷寒的肥達氏（
Widal test）反應(yīng)，診斷斑疹傷寒的外—裴氏反應(yīng)（weil-felix test）。
【 實驗材料 】
診斷菌液, 1:10稀釋的待檢血清，生理鹽水，小試管，刻度吸管，試管架，恒溫水浴箱。
【 實驗方法 】
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（1）稀釋待檢血清取8支試管排列于試管架上,依次編號,每管加入0.5ml生理鹽水。于第1管中加入0.5ml待檢血清,充分混勻后,吸出 0.5ml加入第2管,同法混勻后又吸出0.5ml加入第3管,依次類推,連續(xù)稀釋至第7管,最后從第7管中吸出0.5ml棄去。第8管為生理鹽水對照管。
（2）于各管中加入診斷菌液0.5ml,振搖試管架，充分混勻。
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試管凝集反應(yīng)操作程序
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(3)將試管靜置于37oC恒溫水浴箱中40min。
【 結(jié)果分析 】
（ 1）首先觀察陰性對照管，應(yīng)無凝集現(xiàn)象，管底沉積呈圓形，邊緣整齊，輕輕搖動則沉積菌分散均勻呈混濁現(xiàn)象。
? 觀察實驗管，凝集現(xiàn)象可根據(jù)強弱程度，分為五級：
++++ 細菌全部凝集，管底形成大片凝集物。
+++ 細菌大部分凝集，管底的片狀凝集物較小而薄。
++ 約半數(shù)的細菌發(fā)生凝集，管底出現(xiàn)凝集環(huán)。
+ 僅有少部分細菌凝集，管底可見沉積的細菌周邊有稀疏、點狀的凝集物。
— 液體混濁，無凝集。
（ 3）血清抗體效價的判定：以出現(xiàn)明顯凝集現(xiàn)象（++）的血清最高稀釋度作為受檢血清的抗體效價。
【 注意事項 】
實驗中應(yīng)注意反應(yīng)體系的溫度、電解質(zhì)濃度及酸堿度（ pH值）。
二、間接凝集反應(yīng)
將可溶性抗原（或抗體）先吸附在一種與免疫無關(guān)，一定大小的載體顆粒表面成為致敏載體顆粒，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼可見的特異性凝集現(xiàn)象，稱間接凝集反應(yīng)，此法敏感度比直接凝集反應(yīng)高，因而廣泛地應(yīng)用于臨床檢測中，間接凝集反應(yīng)中常用的載體顆粒有人 “ O”型紅細胞、動物紅細胞、活性炭或硅酸鋁顆粒，聚苯乙烯乳膠微球等。
