核酸擴(kuò)增—鏈置換擴(kuò)增技術(shù)(SDA)
SDA是一種基于酶促反應(yīng)的DNA體外等溫擴(kuò)增技術(shù)，采用標(biāo)記的兩種不同熒光基團(tuán)的探針。在SDA過程中，該探針被摻入到雙鏈擴(kuò)增產(chǎn)物中，由限制內(nèi)切酶的酶切使淬滅基團(tuán)與熒光基團(tuán)分開，從而釋放熒光，用熒光偏振檢測法定量檢測。SDA較之PCR有更高的擴(kuò)增效率，耗時僅30min。其基本系統(tǒng)包括一種限制性核酸內(nèi)切酶、一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶、兩對引物、dNTPs以及鈣、鎂離子和緩沖系統(tǒng)?；具^程包括準(zhǔn)備單鏈DNA模板、生成兩端帶酶切位點的目的DNA片段、SDA循環(huán)三個階段。 SDA技術(shù)同樣具有較高的敏感性和特異性，但由于擴(kuò)增時間和模板DNA濃度的影響可能會出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的累積，因此需要利用熱穩(wěn)定機(jī)制優(yōu)化其擴(kuò)增條件。
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