福林酚比色法原理
原理蛋白質(zhì)與福林(Folin)-酚試劑反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物。作用機(jī)理主要是蛋白質(zhì)中的肽鍵與堿性銅鹽產(chǎn)生雙縮脲反應(yīng)，同時(shí)也由于蛋白質(zhì)中存在的酪氨酸與色氨酸同磷鉬酸-磷鎢酸試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色。呈色強(qiáng)度與蛋白質(zhì)含量成正比，是檢測(cè)可溶性蛋白質(zhì)含量最靈敏的經(jīng)典方法之一。
此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測(cè)蛋白質(zhì)的靈敏度。這個(gè)方法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點(diǎn)是費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)，要嚴(yán)格控制操作時(shí)間，標(biāo)準(zhǔn)曲線也不是嚴(yán)格的直線形式，且專一性較差，干擾物質(zhì)較多。
福林酚比色法注意事項(xiàng)
(1) Folin-酚乙試劑在酸性條件下較穩(wěn)定，而Folin－酚甲試劑是在堿性條件下與蛋白質(zhì)作用生成堿性的銅－蛋白質(zhì)溶液。當(dāng)Folin－酚乙試劑加入后，應(yīng)迅速搖勻（加一管搖一管），使還原反應(yīng)產(chǎn)生在磷鉬酸－磷鎢酸試劑被破壞之前。
(2) 血清稀釋的倍數(shù)應(yīng)使蛋白質(zhì)含量在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍之內(nèi)，若超過此范圍則需將血清酌情稀釋。
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