電泳法分離混合蛋白質(zhì)的基本原理是什么
是根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷不同即酸堿性質(zhì)不同分離蛋白質(zhì)混合物的方法。
1、電泳：在外電場的作用下，帶點顆粒將向著與其電性相反的電極移動，這種現(xiàn)象稱為電泳。電泳技術(shù)可用于氨基酸、肽、蛋白質(zhì)和核苷酸等生物分子的分析分離和制備。 區(qū)帶電泳是由于在支持物上電泳蛋白質(zhì)混合物被分離為若干區(qū)帶。
電泳前用緩沖液浸潤薄膜或濾紙等支持物或用緩沖液直接配置成凝膠，將待分離的蛋白質(zhì)樣品加在它的一端或中央，支持物的兩端與電極連接，通電電泳。電泳完畢，各個組分分布在不同的區(qū)域，用顯色劑（蛋白質(zhì)可用考馬斯亮藍或氨基黑等染色）顯色后可以顯示出各個組分。
氨基酸混合物特別是寡聚核苷酸混合物一次電泳往往不能完全分開。這種情況可以將第一次電泳分開的斑點通過支持介質(zhì)間的接觸印跡轉(zhuǎn)移到第二個支持介質(zhì)上，旋轉(zhuǎn)90°，進行第二次電泳。這種方法稱為雙向電泳。
2、聚丙烯酰胺凝膠電泳：以聚丙烯酰胺凝膠為支持物，一般制成凝膠柱或凝膠板，凝膠是由相連的兩部分組成（小的部分是濃縮膠，大的部分為分離膠），這兩部分凝膠的濃度、緩沖液組分和離子強度、pH以及電場強度都是不同的，即不連續(xù)性。電泳時樣品首先在不連續(xù)的兩相間積聚濃縮而成很薄的起始區(qū)帶，然后再進行電泳分離。 電泳有三種物理效應(yīng)：1、樣品的濃度效應(yīng)；2、凝膠對被分離分子的篩選效應(yīng)；3、一般電泳分離的電荷效應(yīng)。
3、毛細管電泳：高效毛細管電泳、毛細管區(qū)帶電泳、自由溶液毛細管電泳、毛細管電泳，可分離氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、DNA片段和核酸以及多種小分子，也可用于手性化合物的分離。
毛細管減少了由于熱效應(yīng)產(chǎn)生的許多問題，可以提高熱散失，有助于消除由于熱引起的擴散增加而造成的對流和區(qū)帶變寬，因此管中不需要加入穩(wěn)定介質(zhì)即可進行自由流動電泳。
電泳遷移引起溶液中荷電分子向相反電荷的電極移動，雖然被分析樣品因電泳遷移而分離，然而電滲作用使溶液向負極流動，而且電滲電流很強，其速度一般比樣品的電泳速率答，因此所有的正、負離子和中性分子都被推向負極。對荷正電分子來說，電泳遷移和電滲流效果是一致的，而且移動最快，最先達到負極。隨著被分離的分子接近負極，它們都將通過紫外檢測器并把信號傳遞給記錄儀。所得結(jié)果是被分離組分的紫外吸收對時間的峰譜。
4、等點聚焦（IEF）分離蛋白質(zhì)混合物是在具有pH梯度的介質(zhì)（如濃蔗糖溶液）中進行。在外電場作用下各種蛋白質(zhì)將移向并聚焦在等于其等電點的梯度處，并形成一個很窄的區(qū)帶。
pH梯度制作一般利用兩性電解質(zhì)，它是脂肪族多胺和多羧類的同系物，它們具有相近但不相同的解離常數(shù)和等電點。在外電場作用下，自然形成pH梯度。
5、層析聚焦：根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點差異分離蛋白質(zhì)混合物的柱層析方法。
原理：當(dāng)用特種緩沖液滴洗填充在柱中的特種多緩沖交換劑時，就會在層析柱中自上而下自動的建立起連續(xù)的pH梯度；同時加在柱上端的蛋白質(zhì)樣品也隨多緩沖液的展開按各自的等電點聚焦在相應(yīng)的pH區(qū)段。并在展開過程中隨pH梯度下移，蛋白質(zhì)混合物的各組分先后從柱中流出，達到分離純化的目的。
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焦點事件
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