手把手教您給細(xì)胞染色
細(xì)胞凋亡、細(xì)胞計(jì)數(shù)都會用到細(xì)胞染色
今天我們就聊聊：
新手入門
如何輕松搞定細(xì)胞染色，
給你的細(xì)胞一個(gè)精致瑞麗的妝容？
細(xì)胞骨架的熒光染色
臺 盼 藍(lán) 染 色
臺盼藍(lán)染色是細(xì)胞培養(yǎng)常見的實(shí)驗(yàn)，用于細(xì)胞計(jì)數(shù)，檢測細(xì)胞活性。健康的正常細(xì)胞能夠排斥臺盼藍(lán)，而死亡的細(xì)胞，膜的完整性喪失，通透性增加，細(xì)胞可被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色。
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小鼠胚胎干細(xì)胞臺盼藍(lán)染色
三步輕松搞定臺盼藍(lán)染色：
1、胰酶消化貼壁細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液，并作適當(dāng)稀釋（106?細(xì)胞/ml）。
2、染色：細(xì)胞懸液與0.4%臺盼藍(lán)溶液以9:1混合混勻。
3、計(jì)數(shù)：在三分鐘內(nèi)，用計(jì)數(shù)板分別計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞?。?
臺盼藍(lán)染色看起來so easy，但新手入門還是需要注意：
1、染色時(shí)間不能太長，否則活細(xì)胞也會逐漸積累染料而染成顏色，使檢測結(jié)果偏離。
2、可結(jié)合細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力檢測。
3、有潛在致癌危險(xiǎn)，為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
BI臺盼藍(lán)染液
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細(xì)胞免疫熒光染色
熒光顯微鏡技術(shù)，不僅用于研究蛋白結(jié)構(gòu)，對細(xì)胞凋亡檢測也具有重要意義。常用的包括：Hoechst、碘化丙啶（Propidium-Iodide，PI）、annexin-v、JC-1、鈣黃綠素-AM等方法。
hoechst染色，紫外光下核染為藍(lán)色
hoechst可以穿過活細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合，有hoechest33342和hoechst33258兩種，區(qū)別不大。但是hoechst33342對細(xì)胞的毒性作用更小一些，所以一般hoechsts33258用于細(xì)胞固定后再染色，而hoechst33342則可以對活細(xì)胞直接進(jìn)行染色！
用PI單一染色觀測培養(yǎng)細(xì)胞，只能表示細(xì)胞的壞死情況，而不是凋亡（當(dāng)然晚期凋亡PI亦可著色）。但是如果您只是想知道細(xì)胞的死亡情況，而不是仔細(xì)區(qū)分壞死或凋亡，那么PI單一染色也可以。
JC-1染色非常簡單。首先可將成品JC-1以DMSO配成儲存液（1~5mg/ml），儲存于-20℃，用時(shí)以培養(yǎng)液稀釋至10ug/ml 終濃度。對貼壁細(xì)胞可以直接棄去培養(yǎng)液，漂洗細(xì)胞后直接加入染色液，10~30 min后在熒光顯微鏡下或者激光共聚焦下觀察。用于懸浮細(xì)胞時(shí)還可以通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，收集紅/綠信號強(qiáng)度，計(jì)算其強(qiáng)度比。
總結(jié)
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焦點(diǎn)事件
