耐高溫DNA聚合酶的相關(guān)介紹
特性
良好的熱穩(wěn)定性；
70℃ 2h，殘留90%活性；
93℃ 2h，殘留60%活性；
94℃ 2h，殘留40%活性。
5’→3’聚合酶活性，對(duì)dATP有優(yōu)先聚合活性；
5’→3’外切酶活性；
無(wú)3’→5’外切酶活性。
用途
聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction, PCR)。
Taq酶擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物，3’末端總是帶有1個(gè)非模板依賴(lài)型的突出堿基，而這個(gè)堿基幾乎總是A，因?yàn)門(mén)aq酶對(duì)dATP具有優(yōu)先聚合活性，故可用T載體克隆。
缺點(diǎn)
無(wú)3’→5’閱讀校正功能，在PCR擴(kuò)增過(guò)程可引起錯(cuò)配，30次循環(huán)錯(cuò)配率約0.25%。
措施：選擇高保真Taq酶，如Pfu。
原因：Pfu具有3’→5’外切酶活性。
注意：Pfu擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
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