real-time PCR中內(nèi)參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內(nèi)參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實(shí)驗體系有嚴(yán)重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內(nèi)參的CT值應(yīng)該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實(shí)驗處理對內(nèi)參的量產(chǎn)生了影響,必須換一個基因做內(nèi)參。還有就是你的加樣量誤差很大。這樣的話,建議你內(nèi)參和目的基因在一個管子內(nèi)做。各自選用不同的顏色標(biāo)記的探針,不用CYBR Green。這樣就沒有任何加樣誤差了。
這個所謂的“校正”就是保持每個樣本的加樣量的一致。
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