結(jié)締組織染色實(shí)驗(yàn)——膠原蛋白、彈力蛋白和黏蛋白染色
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 黏蛋白是多糖與蛋白質(zhì)結(jié)合的復(fù)合物，組織內(nèi)含有硫酸根等成分，帶有酸性物質(zhì)，可稱為酸性黏液（黏蛋白）。彈力纖維中的彈性蛋白由一種凝膠狀的肽鏈組成，通過(guò)非極性吸附顯色。膠原纖維是由纖維母細(xì)胞產(chǎn)生的一種膠原蛋白鉸鏈而成，易與酸性染料結(jié)合。經(jīng)過(guò)組合染色后，可分別顯示膠原蛋白、彈力蛋白和黏蛋白成分。 |
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| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 阿爾辛藍(lán)染色液：阿爾辛藍(lán)（Alcian blue 8 GS，由上海試劑三廠生產(chǎn)）1 g，冰醋酸 3 ml，蒸餾水 97 ml。 間苯二酚-復(fù)紅染色液：間苯二酚 2 g，堿性復(fù)紅 2 g，蒸餾水 400 ml，30％ 三氯化鐵 3 ml，鹽酸 2 ml。先將間苯二酚、復(fù)紅和蒸餾水混合攪拌均勻，煮沸后加入三氯化鐵，再煮沸攪拌 3～5 min，冷卻后過(guò)濾。將濾紙上的沉淀物一起放在隔水式恒溫箱中烤干，取出放入燒杯中，并加入 95％ 乙醇 200 mU 放在水浴鍋內(nèi)加熱攪拌溶解，取出濾紙，盛于棕色試劑瓶?jī)?nèi)，再補(bǔ) 20 ml 的 95％ 乙醇，最后加入鹽酸 4 ml，混合使用，室溫下保存。 1. 石蠟組織切片，常規(guī)脫蠟至水。 2. 95％ 乙醇浸洗 2 次，浸入間苯二酚-復(fù)紅染色液內(nèi) 1 h 左右。 3. 直接用 95％ 乙醇快速分化 2 次，浸入蒸餾水內(nèi) 1 min。 4. 阿爾辛藍(lán)染色液染色 15 min，蒸餾水洗 2 次。 5. 用 3％ 乙酸液浸泡 1 min，蒸餾水洗 2 次。 6. 滴染麗春紅-苦味酸染色液 3 min。 7. 無(wú)水乙醇脫水、二甲苯透明和中性樹膠封固。 展開? |
| 注意事項(xiàng) | 1. 間苯二酚-復(fù)紅染色液裝入試劑瓶中，將瓶口塞緊，放在冰箱內(nèi)保存。 2. 麗春紅-苦味酸染色后，迅速脫水、過(guò)濾紙吸干，透明和封固。 |
| 其他 | 結(jié)果：黏蛋白呈綠色，彈力蛋白呈紫色，膠原蛋白呈紅色，背景呈淡黃色。 |
