摘 要 本文建立了應(yīng)用固相萃取－高效液相色譜法（SPE-HPLC）測(cè)定飼料中磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉等五種磺胺類藥物的方法?？疾炝搜趸X小柱的最大飽和容量及洗脫條件，優(yōu)化了色譜條件：流動(dòng)相為乙睛和水（25:75,v/v）,流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。在優(yōu)化條件下，方法檢出限為0.1μg/mL，線性范圍在0.2μg/mL～200μg/ mL之間，線性相關(guān)系數(shù)高于0.9996。將該方法用于雞配合飼料、豬配合飼料和濃縮飼料中磺胺類藥物殘留的測(cè)定，不同添加濃度的回收率均高于80%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤10％，能夠滿足實(shí)際樣品的分析要求。

關(guān)鍵詞 固相萃??；高效液相色譜法；磺胺類藥物；

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1．引言

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磺胺類藥物（Sulfonamides, SAs）都具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)，廣泛用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病。集約化養(yǎng)豬場(chǎng)常用抗生素藥物混入飼料中防治疫病,磺胺類藥物其比例一般是:預(yù)防量100―200PPM,治療量300-500PPM。

磺胺類藥物的測(cè)定方法報(bào)導(dǎo)的文獻(xiàn)有很多，基本上都是用高效液相色譜或液質(zhì)的方法測(cè)定動(dòng)物組織、血液、蛋、奶、蜂蜜中的7-11種磺胺。過程相差不大：有機(jī)相除蛋白→乙睛提取→堿性氧化鋁SPE柱凈化→濃縮→高效液相色譜紫外檢測(cè)（或柱后衍生，熒光檢測(cè)）或高效液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)。由于飼料樣品成分的多樣性和復(fù)雜性使得測(cè)定其中磺胺類藥物難度較大，文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)也較少。在這篇文章中，我們?cè)敿?xì)的闡述了用乙腈作為提取劑、通過堿性氧化鋁SPE小柱凈化后反相高效液相色譜儀紫外檢測(cè)器檢測(cè)飼料產(chǎn)品中五種磺胺的殘留量。

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2．實(shí)驗(yàn)部分

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2.1儀器

WATERS600型高效液相色譜儀，C18色譜柱（5μm ，250mm×4.6mm）。選用乙睛和水作為流動(dòng)相，乙睛和水體積比例為25:75,流動(dòng)相的流速為1.0mL/min；WATERS474二極管陣列檢測(cè)器,波長(zhǎng)為270nm；WATERS 717plus 自動(dòng)進(jìn)樣器，進(jìn)樣量 為 20μL。

2.2 試劑及材料

乙腈和甲醇為色譜純（Fisher公司）；冰醋酸為優(yōu)級(jí)純（國(guó)產(chǎn)）；其它試劑為分析純，國(guó)產(chǎn)，

未進(jìn)一步處理直接使用。磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma公司，純度>99%）；堿性氧化鋁SPE 小柱:Speed SPE Cartridges Alumina Basic ALB (ABI公司) ，規(guī)格為1000mg/12mL；

2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別配制五種磺胺的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，濃度為1mg/mL，乙腈溶解（注：磺胺喹惡啉用甲醇溶解）。－20℃冰箱保存一個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)工作液現(xiàn)用現(xiàn)配，用流動(dòng)相定容。

2.4 樣品前處理

2.4.1提取? 稱取配合飼料、濃縮飼料、添加劑預(yù)混合飼料樣品2g，置于具塞錐形瓶中，加入50 mL的乙睛于振蕩器振蕩提取30min，過濾，濾液備用。

2.4.2 凈化? 準(zhǔn)確吸取試液(２.4.1)：配合飼料10～20mL；濃縮飼料、添加劑預(yù)混合飼料2 mL,移入用10mL乙睛淋洗過的堿性氧化鋁小柱中,令其自然流速流出。待試液全部流出后，吹干，用兩次2mL流動(dòng)相洗脫，收集洗脫液, 并過0.45um的濾膜，濾液上機(jī)測(cè)定。

3.結(jié)果與討論

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3.1色譜條件的優(yōu)化

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考察了乙睛+水+冰乙酸流動(dòng)相體系，結(jié)果如圖所示（見下圖）。通過色譜圖可知，在乙睛，水和冰乙酸體積比為75：25：3時(shí)最為適宜。在此條件下，五種磺胺類藥物能夠達(dá)到基線分離。另外，金霉素、青霉素等藥物對(duì)其無干擾。

3.2 分析性能

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在優(yōu)化條件下，磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉等五種磺胺類藥物在0.2～200μg/mL濃度范圍內(nèi)，濃度與響應(yīng)強(qiáng)度具有良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)高于0.999，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于5%。結(jié)果見表2：

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