酸性磷酸酯酶動(dòng)力學(xué)性質(zhì)分析

實(shí)驗(yàn)（二） pH對(duì)酶活力的影響——最適pH的測(cè)定

[原理]

pH對(duì)酶活力的影響極為顯著。酶表現(xiàn)其最高活性時(shí)所處的pH即酶的最適pH，因?yàn)橥ǔ８鞣N酶只在一定pH范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活力；一種酶在不同pH條件下所表現(xiàn)出來的活性不同。

pH之所以對(duì)酶活性有很大影響，很可能是因?yàn)樗淖兞嗣富钚圆课挥嘘P(guān)基團(tuán)的解離狀態(tài)。在最適pH時(shí)，酶分子上活性基團(tuán)的解離狀態(tài)，最適于酶與底物的結(jié)合；而高于或低于最適pH時(shí)，酶活性部位基團(tuán)解離狀態(tài)不利于酶與底物的結(jié)合，酶活力也相應(yīng)降低。pH也可影響底物的解離及反應(yīng)系統(tǒng)中其它組分的解離。緩沖系統(tǒng)的離子性質(zhì)和離子強(qiáng)度，也可能對(duì)酶反應(yīng)產(chǎn)生影響。另外，pH除了對(duì)酶活性有很大影響外，對(duì)酶的穩(wěn)定性也有很大影響。過高過低的pH會(huì)改變酶的活性中心的構(gòu)象，或甚至改變整個(gè)酶分子的結(jié)構(gòu)使其變性失活。

本實(shí)驗(yàn)測(cè)定pH對(duì)酸性磷酸酯酶活性的影響并測(cè)定最適pH。

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[方法和步驟]

取11支試管0～10編號(hào)，0號(hào)為空白。各管加入0.1mL 25mmol/L磷酸苯二鈉水溶液。從l號(hào)管至10號(hào)管依次加入不同pH的緩沖液0.4mL，搖勻。于35℃恒溫水浴預(yù)熱2min。各管記時(shí)加入稀釋好的酶液0.5mL，充分搖勻，精確反應(yīng)15min后，加入1mol/L碳酸鈉溶液2mL，再加入0.5mL Folin-酚稀溶液，繼續(xù)保溫顯色10min?？瞻坠芩? 試劑 相同，但酶液最后加入。取出冷卻后，以0號(hào)管作空白，置 分光光度計(jì) 中在680nm波長(zhǎng)處讀取各管的吸光度A 680 值。

注：0號(hào)管反應(yīng)pH為5.5，酶液最后加入。

[數(shù)據(jù)處理]

以反應(yīng)pH為橫坐標(biāo)，A 680 （代表初速度）為縱坐標(biāo)，繪制pH～酶活力曲線，求出酸性磷酸單 酯酶 在本實(shí)驗(yàn)條件下的最適pH。

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