熒光定量PCR中溶解曲線的意思
溶解曲線是判斷擴(kuò)增產(chǎn)物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關(guān)系，擴(kuò)增什么基因就應(yīng)該有其相對(duì)應(yīng)的溶解曲線，類似于電泳。那么你擴(kuò)增幾種基因就應(yīng)該有幾種對(duì)應(yīng)的峰（一般SYBR法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個(gè)跟擴(kuò)增片段長短有關(guān)系。出現(xiàn)其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組DNA污染的峰會(huì)在90℃以后。出現(xiàn)引物二聚體可能是引物設(shè)計(jì)、引物加量等原因（也有可能是從加完反應(yīng)液到上機(jī)開始PCR這之間的時(shí)間過長）所致；基因組DNA那么考慮設(shè)計(jì)跨內(nèi)含子引物或者實(shí)驗(yàn)之前做gDNA的消除工作。而陰性對(duì)照有目的峰那可能就是模板污染，注意實(shí)驗(yàn)操作等避免模板污染。
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