人 對氧磷酶1(PON1) 酶聯(lián)免疫 分析

試劑 盒使用說明書

本試劑僅供研究使用 ?? ????? 目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中對氧磷酶1(PON1)的含量。

實驗原理 ：

??? 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定 標本 中 人對氧磷酶1(PON1) 水 平。用純化的 人對氧磷酶1(PON1) 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 對氧磷酶1(PON1) ，再與 HRP 標記的對氧磷酶 1(PON1) 抗體結(jié)合，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復(fù)合物 ，經(jīng)過徹底洗滌后 加 底物TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 對氧磷酶1(PON1) 呈正相關(guān)。用酶標儀在 450 nm波長下測定吸光度（ OD 值）， 通過標準曲線 計算樣品 中人對氧磷酶1(PON1) 濃度。

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試劑盒組成 ：

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樣本處理及要求 ：

1.?血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2.?血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3.?尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.?細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5.?組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?2-8 ℃的溫度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6.?標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可 將標本放于 -20 ℃保存，但 應(yīng) 避免反復(fù)凍融 .

7.? 不能檢測含NaN3的樣品 ，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（ HRP ）活性。

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操作步驟：

1.? 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10 孔，在第一、第二孔中分別加標準品 100 μ l，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50 μ l，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取 100 μ l分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50 μ l，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50 μ l棄掉，再各取