問(wèn)：

我要做LUCIFERASE 了，可是我一點(diǎn)概念都沒(méi)有。有哪位有具體的操作PROTOCOL？

還有一些白癡問(wèn)題luciferase 要檢測(cè)什么呢？是把我的帶有LUC的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞里，然后檢測(cè)它的活性？什么意思??？

我檢測(cè)它的目的是什么呢？我只知道我現(xiàn)在有一個(gè)LUC的質(zhì)粒，老板讓我準(zhǔn)備做，我都不知道是什么目的和思路......

謝謝啦

答：

luciferase檢測(cè)的是蟲(chóng)熒光素酶基因的表達(dá)情況，一般我們構(gòu)建luciferase載體的時(shí)候是把待研究的基因裝在luciferase基因的前面，從而以luciferase的表達(dá)來(lái)了解目的基因的表達(dá)情況。

至于具體的PROTOCOL，因?yàn)椴涣私饽愕膶?shí)驗(yàn)以及細(xì)胞情況，比較難說(shuō)，而且各種luciferase檢測(cè)試劑也不一樣。我們實(shí)驗(yàn)室做的是共轉(zhuǎn)染構(gòu)建的一段基因啟動(dòng)子區(qū)的luciferase表達(dá)載體和目的質(zhì)粒，從而初步研究目的基因?qū)τ谠搯?dòng)子的作用。具體步驟：共轉(zhuǎn)染至少80%匯片的貼壁細(xì)胞，然后48H把細(xì)胞消化下來(lái)，按照l(shuí)uciferase檢測(cè)試劑的說(shuō)明書(shū)上機(jī)檢測(cè)。