真核細胞常見表達載體
1、pCMVp-NEO-BAN載體
特點: 該真核細胞表達載體分子量為6600堿基對,主要由CMVp啟動子、兔β-球蛋白基因內(nèi)含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架構(gòu)成, 在大多數(shù)真核細胞內(nèi)都能高水平穩(wěn)定地表達外源目的基因。更重要的是,由于該真核細胞表達載體中抗neo基因存在,轉(zhuǎn)染細胞后,用G418篩選,可建立穩(wěn)定的、高表達目的基因的細胞株。
插入外源基因的克隆位點包括Sal1、BamH1和EcoR1位點。注意在此載體中有二個EcoR1位點存在。
2、pEGFP, 增強型絳色熒光蛋白表達載體(Enhanced Fluorecent Protein Vector)
特點: pEGFP表達載體中含有綠色熒光蛋白,在PCMV啟動子驅(qū)動下,在真核細胞中高水平表達。載體骨架中的SV40 origin使該載體在任何表達SV40 T 抗原的真核細胞內(nèi)進行復制。Neo抗性盒由SV40早期啟動子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信號組成,能應用G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的真核細胞株。此外, 載體中的pUC origin 能保證該載體在大腸桿菌中的復制, 而位于此表達盒上游的細菌啟動子能驅(qū)動kanamycin抗性基因在大腸桿菌中的表達。
用途: 該表達載體EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位點,將外源基因扦入這些位點,將合成外源基因和EGFP的融合基因。 借此可確定外源基因在細胞內(nèi)的表達和/或組織中的定位。
亦可用于檢測克隆的啟動子活性(取代CMV啟動子,Acet1-Nhe1)。
3、pEGFT-Actin, 增強型綠色熒光蛋白/人肌動蛋白表達載體
特點: pEGFP-Actin表達載體中含有綠色熒光蛋白和人胞漿β-肌動蛋白基因,在PCMV啟動子驅(qū)動下,在真核細胞中高水平表達。載體骨架中的SV40 origin使該載體在任何表達SV40 T 抗原的真核細胞內(nèi)進行復制。Neo抗性盒由SV40早期啟動子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信號組成,能應用G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的真核細胞株。此外, 載體中的pUC origin 能保證該載體在大腸桿菌中的復制, 而位于此表達盒上游的細菌啟動子能驅(qū)動kanamycin抗性基因在大腸桿菌中的表達。
用途: pEGFP-Actin載體在真核細胞表達EGFP-Actin融合蛋白,該蛋白能整合到胞內(nèi)正在生的肌動蛋白,因而在活細胞和固定細胞中觀察到細胞內(nèi)含肌動蛋白的亞細胞結(jié)構(gòu)。
4、pSV2表達載體
特點:該表達質(zhì)粒是以病責SV40啟動子驅(qū)動在真核細胞目的基因進行表達的,克隆位點為Hind111。SV40啟動子具有組織/細胞的選擇特異性。此載體不含neo基因,故不能用來篩選、建立穩(wěn)定的表達細胞株。
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